[发明专利]一种肝病辅食型鳕鱼皮胶原蛋白肽的制备方法

权利要求书

1.一种肝病辅食型鳕鱼皮胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）鳕鱼皮预处理：将鳕鱼皮洗净后用4℃纯水浸泡20-30min，后用浓度0.1-0.2mol/L NaOH 浸泡 6-8小时，用清水冲洗至 pH=7，沥干水分后，用浓度0.1-0.2mol/L的冰醋酸溶胀10-12小时，最后用剪刀剪碎；

（2）酶解反应：将步骤（1）预处理后的鳕鱼皮与水按照1:4（w/v）的料液比混合，然后加入胰蛋白酶酶解反应；

（3）超滤：步骤（2）酶解反应结束后，灭酶，离心，收集上清液，上清液用超滤膜超滤，截留获得分子量为5-10KDa的组分，冷冻干燥后得GM2组分；

（4）DEAE-Sepharose FF离子交换层析分离：将GM2组分上DEAE-Sepharose FF离子交换柱，采用pH4.5的醋酸-醋酸钠缓冲液作为洗脱剂洗脱，收集洗脱液，冷冻干燥后得到GM2-2组分；

（5）Sephadex G-25层析分离：将GM2-2组分经Sephadex G-25凝胶柱洗脱后，从上样开始计时，收集90-100min时间段洗脱液获得GM2-2-3组分，冷冻干燥后得到肝病辅食型胶原蛋白肽。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）酶解条件为：胰蛋白酶用量为每g鳕鱼皮加入2000U，酶解温度50℃，pH 6，时间8h。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：步骤（4）中DEAE-Sepharose FF离子交换柱的洗脱条件具体为： GM2组分加超纯水配制成200mg/ml的溶液上样，每次上样量为2ml，洗脱速度为1ml/min。

4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：步骤（5）中Sephadex G-25凝胶柱的洗脱条件具体为：

柱尺寸：2.6×80cm；柱料：Sephadex G-25，以5mg/ml压柱12h，至填充量为70±1cm；将GM2-2组分加超纯水配制成1mg/ml的溶液上样，上样量：1.5ml，超纯水洗脱，洗脱速度：0.5ml/min。