[发明专利]bbeAMP基因、其编码的蛋白质、以bbeAMP为目的基因生产的融合蛋白及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及中国白氏文昌鱼的bbeAMP基因、由bbeAMP基因编码的蛋白质、以bbeAMP为目的基因生产的重组融合蛋白及该重组融合蛋白的应用。

背景技术

文昌鱼在分类上属于脊索动物门(Chordata)头索动物亚门(Cephalochordata)头索纲鳃口科文昌鱼属，自五亿年前出现至今一直保持着古老的特性及原始的性状，因此被认为是无脊椎动物进化到脊椎动物的过渡类型，其形体结构、发育模式和基因组都是脊椎动物最简单模型的代表。近几年的研究表明文昌鱼，除了作为传统的发育生物学研究的模式生物外，正在成为研究免疫系统的理想实验动物模型。文昌鱼生活喜在海滩泥沙中，这种生活环境势必需要一套抵御病原微生物侵袭的系统，而在先天免疫中NF-κB信号通路发挥着重要的作用，它在参与免疫应答和炎症反应过程中通过调节多种效应分子的表达来控制免疫系统的运作。人们在对果蝇和高等生物的免疫应答研究中发现NF-κB启动了多种杀伤的效应分子。

中国2013年2月13日公开的专利CN102925449A报道了一种细胞内信号传导蛋白BbSma6/7及其编码基因，该基因来自青岛文昌鱼，其可从理论上提高对免疫系统构成和免疫应答机制的认识，为在基因水平开发细菌防治药物奠定基础。

现有技术中，中国2013年5月22日公开的专利CN103114094A报道了文昌鱼细胞核内蛋白AmphiAkirin及其编码基因，AmphiAkirin蛋白在细菌冲击成体文昌鱼后表达出现上调，在防治细菌内的浸染方面提供理论依据；AmphiAkirin蛋白可以激活NF-κB信号通路，为病害的免疫防治技术提供理论依据和基因来 源。

本发明将进一步以文昌鱼为模型，研究新的基因及其编码的蛋白质，并研究此基因在先天免疫中的功能。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供中国白氏文昌鱼体内的bbeAMP基因、bbeAMP基因的制备方法以及由bbeAMP基因编码的蛋白质。

本发明所要解决的另一技术问题在于提供以bbeAMP为目的基因生产重组融合蛋白的方法以及由此方法生产的重组融合蛋白。

本发明进一步要解决的技术问题在于提供上述重组融合蛋白在制备辅助治疗感染性疾病药物中的应用。

本发明所提供的bbeAMP基因，其DNA序列如SEQ ID NO：1(bbeAMP1)或SEQ ID NO：2(bbeAMP2)所示。

本发明所提供的制备bbeAMP基因的方法包括以下步骤：

(1)从已有的中国白氏文昌鱼中提取总RNA；

(2)以步骤(1)中提取的总RNA为模板，逆转录合成cDNA；

(3)以cDNA为模板，以SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6为上、下游引物通过PCR扩增得到bbeAMP1基因或以SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8为上、下游引物通过PCR扩增得到bbeAMP2基因。

上述制备bbeAMP基因的方法中，所述总RNA采用Trizol试剂提取，所述cDNA是按照TOYOBO公司的First Strand cDNA Synthesis Kit ReverTra Ace-α-TM(code No.FSK-100)说明书操作进行逆转录合成的。

本发明所提供的由bbeAMP基因编码的蛋白质，其氨基酸序列如SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4所示。

上述由bbeAMP基因编码的蛋白质，所述SEQ ID NO：3序列表示的蛋白 由bbeAMP1基因编码，其含87个氨基酸，分子量为8,978道尔顿，等电点为6.67；SEQ ID NO：4序列表示的蛋白由bbeAMP2基因编码，其含93个氨基酸，分子量为10,308道尔顿，等电点为4.85。

经SMART在线预测，发现bbeAMP基因编码的蛋白除了一段小的信号肽外并没有其他已知的保守结构域。

本发明提供的以bbeAMP为目的基因生产重组融合蛋白的方法，该方法包括以下步骤：