[发明专利]一种分泌性能提高的碱性果胶酶突变体

权利要求书

1.一种分泌性能提高的碱性果胶酶突变体，其特征在于，是将氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的碱性果胶酶的第58位的异亮氨酸I点突变为缬氨酸V。

2.编码权利要求1所述突变体的基因。

3.携带权利要求2所述基因的载体或细胞。

4.一种获得权利要求1所述碱性果胶酶突变体的方法，是通过设计引物对编码碱性果胶酶的基因进行定点突变后表达。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，以质粒pET-20b(+)-pgl为模板设计引物进行突变并将突变后的质粒转化进入E.coli JM109进行扩增，然后以E.coli BL21(DE3)表达含突变基因的重组质粒，得到分泌性能增强的碱性果胶酶突变体。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，用于定点突变的引物是：

pglI58V primer1：5'-AATCATTTATGTTAAGGGAACGATT-3'

pglI58V primer2：5'-TTTGGCGTTGTGTTCGTTTC-3'。

7.应用基因工程菌发酵生产权利要求1所述碱性果胶酶突变体的方法，其特征在于，是将含有编码突变碱性果胶酶的基因的重组菌活化培养后接入含有100μg mL^-1氨苄青霉素的发酵培养基中，于37℃、200r min^-1培养；菌体生长到OD₆₀₀＝0.6，加入IPTG进行诱导，同时将温度调整为30℃，诱导发酵48h。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述活化培养是将重组菌E.coli BL21(DE3)(pET-20b(+)-pglI58V)接种于含有100μg mL^-1氨苄青霉素的种子培养基中，培养温度37℃，200rpm摇床上振荡培养10h。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述种子培养基组成：酵母粉5g/L，胰蛋白胨10g/L，NaCl10g/L，葡萄糖20g/L，pH7.0。

10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基组成：酵母粉24g/L，胰蛋白胨12g/L，甘油5g/L，K₂HPO₄72mmol L^-1，KH₂PO₄17mmol L^-1。