[发明专利]一种双鞭甲藻发酵生产DHA的方法

权利要求书

1.一种双鞭甲藻发酵生产DHA的方法，包括以双鞭甲藻为菌种，采用包括碳源、氮源和无机盐的培养基，通过溶氧调控策略经三级发酵制得二十二碳六烯酸油脂(DHA)，所述以双鞭甲藻发酵生产DHA的方法如下：

1)将双鞭甲藻(Crypthecodinium cohnii)接入装有350mL培养基的2L摇瓶，在22-32℃的摇床中以180rpm的转速，培养20-30h，菌种为双鞭甲藻Crypthecodinium cohnii ATCC30556；

2)按照0.4-1％的接种量将摇瓶的菌种接入装有灭菌后培养基的一级种子发酵罐中，培养温度22-32℃，通气量1-2vvm，压力0.02-0.05MPa，培养25-35h；

3)按照1-3％的接种量将一级种子罐的菌种接入装有灭菌后培养基的二级种子发酵罐中，培养温度22-32℃，通气量1-2vvm，压力0.02-0.05MPa，培养15-25h；

4)按照1-3％的接种量将二级种子罐的菌种接入装有灭菌后培养基的发酵罐中，培养温度22-32℃，压力0.02-0.05MPa，通气量1-2vvm，通过溶氧调控策略控制DO，在发酵过程中采用溶氧转速耦联策略控制DO在50％，整个发酵过程流加40％的氨水控制pH在6.0-7.0，过程中葡萄糖浓度维持在1-5g/L，流加碳源发酵培养60-80h，终止发酵，放罐；其中一级种子、二级种子、发酵培养基中碳源包括葡萄糖、玉米浆粉、糖蜜、甘油和葡萄糖浆中的一种或多种，添加量为60g/L；氮源包括硫酸铵、大豆粉、酵母提取物、蛋白胨、硝酸钠、谷氨酸钠、氨水中的一种或多种，添加量为5g/L。

2.如权利要求1所述的一种双鞭甲藻发酵生产DHA的方法，其特征在于，在发酵培养基碳源中添加20％甘油。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，发酵培养基中添加的组分包括甘氨酸、谷氨酸、色氨酸、赖氨酸、维生素B₁、维生素B₆、维生素B₁₂中的一种或多种，当为其中一种时，添加量为0.001-0.01％；当为其中多种时，任意一种组分的添加量为0.001-0.005％。

4.如权利要求1所述的一种双鞭甲藻发酵生产DHA的方法，其特征在于，一级种子、二级种子、发酵培养基中添加的无机盐包括硫酸镁1.5g/L、氯化钾2g/L、氯化钠13g/L、氯化钙1.0g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、磷酸氢二钾1.0g/L。