[发明专利]一种毛蚶蛋白质的鉴别方法

说明书

技术领域

本发明涉及药品检测方法，具体涉及一种毛蚶蛋白质的鉴别方法，属药品技术领域。

背景技术

毛蚶肉含丰富的蛋白质、维生素及人体所必需的氨基酸，自古就有着食用、药用价值，《医林纂要》注“蚶肉补心血、散瘀血、除烦醒酒、破结消痰”，《日华子本草》注“蚶肉益血色”。近年来，研究报道显示毛蚶有抗肿瘤作用，具有清除体内自由基、提高机体免疫力的功效。毛蚶肉制剂对肺癌、肾癌、胃癌、肝癌等多种癌症具有较好的治疗作用，且安全性良好。

根据文献报道毛蚶蛋白质是毛蚶的主要生物活性成分之一，且富含人体所需的必需氨基酸，8种必需氨基酸占总氨基酸的36.5%。抗癌肽类具有很高的抗癌活性。现有文献动植物蛋白质的含量测定方法较多，但对动植物蛋白质的专属性报道很少，更未见对毛蚶蛋白质专属性鉴别方法的研究报道。 无法在生产和使用中有效的保证产品质量，进而药品疗效得不到保证。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种毛蚶蛋白质多肽的专属性鉴别方法，使毛蚶制剂在生产和使用中有效的保证产品质量，进而保证药品疗效。

本发明是这样实现的：

一种毛蚶蛋白质多肽的鉴别方法，其特征在于使用凝胶色谱柱高效液相色谱法，具体步骤如下：

色谱条件及系统适应性：用亲水球形高聚物为填充剂的凝胶色谱柱；以0.01-0.10mol/L的磷酸盐缓冲液为流动相；检测波长为280 nm；柱温：20-40℃；流速：0.1ml-1ml /min。理论板数按蛋白质分子量100000计算应不低于3000。

制备毛蚶多肽：取毛蚶制 剂研细，称取含毛蚶提取物约5-20g的样品，加10-15倍水超声提取20-40 min，离心5-15 min，取上层液，滤过，滤液按体积分数50-70%（w/v）加入硫酸铵，0～4℃放置过夜，离心，取沉淀，加水5-10ml溶解，以0.5-2%的碳酸氢铵溶液为透析液，用截留分子量为3500的透析膜，0～4℃条件下充分透析（用0.5-2％的BaCl2溶液检查硫酸根离子是否透析完全），将透析膜内溶液转移至20-100ml量瓶内，用水定容，0～4℃保存，即得毛蚶多肽供试品。

测定：取毛蚶多肽供试品溶液10-100μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

毛蚶多肽图谱中在保留时间15.6min左右有一尖锐的特征峰“峰S”， 峰S保留时间差异应在±5%之内。

上述的一种毛蚶多肽的鉴别方法，色谱条件及系统适应性优化为：用亲水球形高聚物为填充剂的凝胶色谱柱；以0.05 mol/L的磷酸盐缓冲液为流动相；检测波长为280 nm；柱温：25℃；流速：0.4ml/min。理论板数按蛋白质分子量100000计算应不低于5000。

上述的一种毛蚶多肽的鉴别方法，制备毛蚶多肽优化为：

取毛蚶制剂研细，称取含毛蚶提取物约10-12g，加10-12倍水超声提取30-35 min，离心8-12 min，取上层液，滤过，滤液按体积分数60-65%（w/v）加入硫酸铵，0～4℃放置过夜，离心，取沉淀，加水10ml溶解，以1%的碳酸氢铵溶液为透析液，用截留分子量为3500的透析膜，0～4℃条件下充分透析（用0.8-1％的BaCl2溶液检查硫酸根离子是否透析完全），将透析膜内溶液转移至25-50ml量瓶内，用水定容，0～4℃保存，即得毛蚶多肽供试品。

上述的一种毛蚶多肽的鉴别方法，制备毛蚶多肽进一步优化为：

毛蚶提取物溶液的制备取毛蚶制剂研细，称取含毛蚶提取物10g，加12倍水超声提取30 min，离心10 min，取上层液，滤过，滤液按体积分数60%（w/v）加入硫酸铵，0～4℃放置过夜，离心，取沉淀，加水10ml溶解，以1%的碳酸氢铵溶液为透析液，用截留分子量为3500的透析膜，0～4℃条件下充分透析（用1％的BaCl2溶液检查硫酸根离子是否透析完全），将透析膜内溶液转移至50ml量瓶内，用水定容，0～4℃保存，即得毛蚶多肽供试品。

上述的一种毛蚶多肽的鉴别方法，测定优化为取毛蚶多肽供试品溶液10-50μl，注入液相色谱仪，测定。

上述的一种毛蚶多肽的鉴别方法，测定进一步优化为取毛蚶多肽试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定。

上述的一种毛蚶多肽的鉴别方法，可用于毛蚶提取物各种制剂的鉴别。

上述的一种毛蚶多肽的鉴别方法，可用于魁蚶、泥蚶、花蛤、扇贝提取物及其各种制剂的鉴别。

本发明的有益效果在于：提供一种毛蚶多肽的鉴别方法，能准确的鉴别毛蚶近源物种魁蚶、泥蚶、扇贝、花蛤等来源的多肽。