[发明专利]生血宝制剂质量检测方法及其标准指纹图谱的构建方法

权利要求书

1.生血宝制剂质量检测方法，其特征在于，所述方法包括：

第一，溶液的制备：

(1)对照品溶液的制备：用体积百分比浓度为50～100％的甲醇将芍药苷配制成每1mL含0.02～0.06mg芍药苷的对照品溶液；

(2)供试品溶液的制备：取液体剂型的生血宝制剂1.0～5.0ml或固体剂型的生血宝制剂0.6～3.0g，溶于25～125mL体积百分比浓度为0～100％的甲醇或体积百分比浓度为0～50％的乙醇中，混匀，配制成供试品溶液；

第二，测定及分析：

高效液相色谱分析：分别精密吸取等量的对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，记录60min的色谱图，即得生血宝制剂指纹图谱；

所述高效液相色谱分析中，色谱柱为C₁₈反相色谱柱；流动相A为乙腈，流动相B为质量百分比浓度为0.1～0.2％的磷酸溶液；采用梯度洗脱方式：

柱温25℃～40℃；流速0.8ml/min～1.2ml/min；检测波长为200～230nm；

将生血宝制剂指纹图谱与生血宝制剂标准指纹图谱相比对，鉴别生血宝制剂有效成分以及是否添加了其它成分；

所述生血宝制剂标准指纹图谱按照如下步骤构建：

高效液相色谱分析：分别精密吸取等量的对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，记录60min的色谱图；

所述高效液相色谱分析中，色谱柱为C₁₈反相色谱柱；流动相A为乙腈，流动相B为质量百分比浓度为0.1～0.2％的磷酸溶液；采用梯度洗脱方式：

柱温25℃～40℃；流速0.8ml/min～1.2ml/min；检测波长为200～230nm；

对10批次生血宝制剂建立指纹图谱，通过分析比较，确定出14个共有特征峰，编号为1～14号，共有峰峰面积总和占总峰面积的90％以上，以第9号峰为参照峰，第1～14号各峰的相对保留时间分别为：0.066～0.074、0.073～0.081、0.210～0.232、0.363～0.404、0.637～0.706、0.745～0.824、0.763～0.844、0.907～1.004、1.000、1.034～1.143、1.086～1.200、1.129～1.248、1.199～1.327、1.239～1.370；以第9号峰为参照峰，第1～14号各峰的相对峰面积分别为：0.390～1.025、0.149～0.381、0.086～0.256、0.319～0.845、0.095～0.236、0.074～0.236、0.031～1.282、0.206～0.585、1.000、0.041～0.102、0.216～0.711、0.183～1.274、0.136～0.865、0.070～0.151；这些共有特征峰构成了生血宝制剂的指纹特征，作为生血宝制剂标准指纹图谱；

所述的生血宝制剂由下述重量份数的原药材组成：

制何首乌100，女贞子120～130，桑葚120～130，墨旱莲120～130，白芍100，黄芪100，狗脊100。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱柱为柱长为250mm的C₁₈反相色谱柱。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生血宝制剂标准指纹图谱中，以第9号峰为参照峰，第1～14号各峰的相对保留时间分别为：0.070～0.070、0.077～0.077、0.221～0.221、0.382～0.385、0.671～0.672、0.784～0.785、0.803～0.804、0.955～0.956、1.000、1.088～1.089、1.143～1.143、1.188～1.189、1.262～1.264、1.304～1.305；以第9号峰为参照峰，第1～14号各峰的相对峰面积分别为：0.410～0.976、0.157～0.363、0.090～0.244、0.336～0.805、0.100～0.225、0.078～0.225、0.033～1.221、0.217～0.557、1.000、0.043～0.097、0.227～0.677、0.193～1.213、0.143～0.824、0.074～0.144。