[发明专利]促卵泡生成素（FSH）定量测定试剂盒及其制备方法与检测方法

说明书

技术领域

本发明属于医疗器械生物类免疫体外诊断领域，主要涉及一种基于磁微粒分离化学发光法定量检测血液中促卵泡生成素(FSH)定量测定试剂盒及其制备方法，以及应用该试剂盒定量检测促卵泡生成素(FSH)的方法。

背景技术

促卵泡生成素(FollicleStimulatingHormone，FSH)是一种由垂体前叶分泌的糖蛋白激素，该激素是垂体分泌的促性腺激素之一。促卵泡生成素(FSH)的主要作用是促进和维持正常的性腺发育和生殖功能。促卵泡生成素(FSH)可以促进女性卵泡生成、成熟，促进颗粒细胞增殖、起卵泡分泌；可以刺激男性睾丸支持细胞发育，并可作用于睾丸曲细精管可促进精子形成。正常人血清中FSH基础值为5～10IU/L。

女性体内的促卵泡生成素(FSH)分泌具有明显的周期性，血液中促卵泡生成素(FSH)的浓度及每日由尿液排泄的促卵泡生成素(FSH)的量随月经周期变化而变化。在绝经或卵巢切除后，以及早熟卵巢的衰退期，血液和尿液中促卵泡生成素(FSH)排出量增加。

促卵泡生成素(FSH)在男性体内能够调控生精小管的发育以及保持生精作用，男性体内的促卵泡生成素(FSH)分泌无明显周期性，但在50岁以后略有升高。男性在睾丸衰退和克兰费尔特氏综合症的初期会出现体内促卵泡生成素(FSH)升高。另外，促卵泡生成素(FSH)的浓度在人体饥饿、肾衰竭、甲状腺机能亢进和肝硬化时也会有所提高。

在国内，促卵泡生成素(FSH)检测主要以国外进口试剂和免疫组化试剂。由于国外进口试剂和和免疫组化试剂的价格都非常昂贵，给患者带来很大的经济负担，非常不利于在基层普及。国内具有自主知识产权的国产促卵泡生成素(FSH)免疫化学发光检测试剂盒目前还较少，并且仅停留在96孔微孔板式技术水平上，这种落后的检测技术的灵敏度较低、线性窄、特异性较差，也不利于高通量的全自动检测。

因此，有待开发对促卵泡生成素(FSH)检测灵敏度高，可靠性强，并能够同时降低检测成本的检测技术。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷，提供一种新的可定量检测促卵泡生成素(FSH)的试剂盒，提高检测灵敏度及可靠性，并降低成本，延长有效期。

为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：

一方面，本发明提供了一种促卵泡生成素(FSH)定量测定试剂盒，该试剂盒包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂和发光底物。

该试剂盒中各组分按照如下方法制备：

一、校准品、质控品的配制方法如下：

用校准品缓冲液溶解促卵泡生成素(FSH)，配置校准品和质控品；其中，所述校准品缓冲液是通过在1L新生牛血清中加入0.01g～0.05g的四环素和0.1g～0.5g硫酸新霉素，溶解后经过0.22μm滤膜处理制备；

二、抗试剂的制备方法如下：

(1)、抗试剂缓冲液的制备：

Tris：12.12mg，四环素：0.01g～0.05g，绵羊血清：1g～5g，新生牛血清3g～10g，马血清1g～5g加入1L纯化水中，充分搅拌至完全溶解；

(2)、异硫氰酸荧光素与促卵泡生成素(FSH)偶联，获得异硫氰酸荧光素标记的促卵泡生成素(FSH)包被抗体：

首先用抗试剂缓冲液将异硫氰酸荧光素配制成浓度为1.0～5.0mg/mL的异硫氰酸荧光素溶液，然后按照促卵泡生成素(FSH)与异硫氰酸荧光素的质量之比为1:1.1，将二者同时转移到棕色玻璃瓶中，室温下搅拌1～2小时，充分反应后使用pH＝8～9的碳酸氢盐缓冲液，进行平衡，然后凝胶层析分离纯化出异硫氰酸荧光素标记的促卵泡生成素(FSH)包被抗体；

(3)、碱性磷酸酶与促卵泡生成素(FSH)的偶联，获得碱性磷酸酶标记的促卵泡生成素(FSH)标记抗体：

首先用抗试剂缓冲液将碱性磷酸酶配制成浓度为1.0～5.0mg/mL的碱性磷酸酶溶液；然后按照碱性磷酸酶与促卵泡生成素(FSH)的摩尔比为1:2～1:10的量将二者转移至棕色瓶中，室温下搅拌4～5小时，充分反应后使用pH＝8～9的碳酸氢盐缓冲液平衡，然后使用凝胶层析分离纯化出碱性磷酸酶标记的促卵泡生成素(FSH)标记抗体，注意含有连接物的试管的避光防护；