[发明专利]促卵泡生成素（FSH）定量测定试剂盒及其制备方法与检测方法

权利要求书

1.一种促卵泡生成素(FSH)定量测定试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂和发光底物；所述试剂盒中各组分按照如下方法制备：

一、校准品、质控品的配制：

采用校准品缓冲液溶解促卵泡生成素(FSH)，配置校准品和质控品；其中，所述校准品缓冲液是通过在1L新生牛血清中加入0.01g～0.05g的四环素和0.1g～0.5g硫酸新霉素，溶解后经过0.22μm滤膜处理制备；

二、抗试剂的配制：

(1)、抗试剂缓冲液的制备：

Tris：12.12mg～60.57mg，四环素：0.01g～0.05g，绵羊血清：1g～5g，新生牛血清3g～10g，马血清1g～5g加入1L纯化水中，充分搅拌至完全溶解；

(2)、将异硫氰酸荧光素标记的促卵泡生成素(FSH)包被抗体和碱性磷酸酶标记的促卵泡生成素(FSH)标记抗体加入到所述抗试剂缓冲液中充分搅拌至完全溶解；

三、磁微粒试剂的制备：

将抗异硫氰酸荧光素抗体与羧基磁珠偶联制得磁微粒试剂；

四、发光底物的制备：

将ALPS溶解于发光底物缓冲液中制得发光底物。

2.根据权利要求1所述的促卵泡生成素(FSH)定量测定试剂盒，其特征在于，所述抗试剂的制备方法如下：

(1)、异硫氰酸荧光素与促卵泡生成素(FSH)的偶联，获得异硫氰酸荧光素标记的促卵泡生成素(FSH)包被抗体：

首先用抗试剂缓冲液将异硫氰酸荧光素配制成浓度为1.0～5.0mg/mL的异硫氰酸荧光素溶液，按照促卵泡生成素(FSH)与异硫氰酸荧光素的质量之比为1:1.1的量，将二者转移到棕色玻璃瓶中，室温下搅拌1～2小时；充分反应后使用pH＝8～9的碳酸氢盐缓冲液，进行平衡，然后凝胶层析分离纯化出异硫氰酸荧光素标记的促卵泡生成素(FSH)抗体包被抗体；

(2)、碱性磷酸酶与促卵泡生成素(FSH)的偶联，获得碱性磷酸酶标记的促卵泡生成素(FSH)标记抗体：

首先用抗试剂缓冲液将碱性磷酸酶配制成浓度为1.0～5.0mg/mL的碱性磷酸酶溶液；按照碱性磷酸酶与促卵泡生成素(FSH)抗体的摩尔比为1:2～1:10的量将二者转移至棕色瓶中，室温下搅拌4～5小时，充分反应后使用pH＝8～9的碳酸氢盐缓冲液平衡，然后使用凝胶层析分离纯化出碱性磷酸酶标记的FSH标记抗体；

(3)、将步骤(1)中获得的异硫氰酸荧光素标记的促卵泡生成素(FSH)包被抗体和步骤(2)中获得的碱性磷酸酶标记的促卵泡生成素(FSH)标记抗体，加入到含有表面活性剂的Tris盐缓冲液中，充分搅拌后获得所述抗试剂；所述表面活性剂为Tween20、TritonX-100、Bronidox中的一种或多种，表面活性剂的添加量为0.01％～0.5％。

3.根据权利要求1所述的一种促卵泡生成素(FSH)定量测定试剂盒，其特征在于，所述磁微粒试剂是按照以下步骤制备的：

(1)、取一定体积的充分混匀后的羧基磁珠浓缩液至反应瓶中，将该反应瓶在磁场中放置15min，待羧基磁珠全部沉降后吸去上清，向反应瓶中加入2～5倍于反应瓶中羧基磁珠体积的磁微粒缓冲液，震荡清洗20-30min；再将反应瓶置于磁场中15min后吸去上清；重复清洗羧基磁珠3遍；最后将羧基磁珠溶液定容到10-50mg/mL，混匀；所述磁微粒缓冲液的配置方法是：Tris：12.12mg，氯化钠5.82mg，甲基纤维醚50g，加入1L纯化水中，充分搅拌至完全溶解；

(2)、连接反应：按照羧基磁珠与抗异硫氰酸荧光素抗体的质量比为100:1的比例，在羧基磁珠中加入抗异硫氰酸荧光素抗体，2～8℃下保持混匀状态反应18小时；

(3)、反应瓶在在磁场放置15min，待羧基磁珠沉降后用磁微粒缓冲液洗3遍，随后定容至10mg/mL，2～8℃保存，制得所需的磁微粒试剂。

4.根据权利要求1所述的一种促卵泡生成素(FSH)定量测定试剂盒，其特征在于，所述发光底物是按照以下步骤制备的：

用4～10倍于ALPS体积的发光底物缓冲液充分溶解ALPS；所述发光底物缓冲液的配置方法是：Tris12.12g～121.14g，氯化钠5.82g，光泽精0.3g，加入1L纯化水中，充分搅拌至完全溶解，用盐酸调节缓冲液的pH至9.5。