[发明专利]一种爪哇棒孢霉菌分生孢子微胶囊的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及害虫生物防治技术领域，更具体地，涉及一种爪哇棒孢霉菌分生孢子微胶囊的制备方法。

背景技术

目前，大量使用化学杀虫剂仍然是防治害虫最主要的方法，然而，化学杀虫剂的使用不仅费用投入较高，且对环境造成污染，影响食品安全；同时还会致使害虫对杀虫剂产生抗性，这些缺点使得人们越来越重视发展害虫生物防治技术。

虫生真菌资源丰富，对人、畜无毒害，且不会造成环境污染，因此真菌治虫在害虫生物防治中占有重要地位。然而，真菌杀虫剂因为本身是生命体，对高温、干旱及紫外线等环境因子敏感，作为防虫制剂的货架寿命短，防治效果不稳定，影响了其发展与应用。因此发展剂型加工技术是解决真菌杀虫剂的稳定性和延长货架寿命的重要途径。目前，真菌杀虫剂已研制出的剂型主要有：原粉剂、粉剂、可湿性粉剂、油剂、颗粒剂及无纺布菌条等。

微胶囊制剂是20世纪30年代开发的新剂型，在70年代中期得到了迅猛发展。微胶囊技术是一种新剂型加工技术，微胶囊化能保护有效成份提高其抗逆能力，能使有效成份缓慢释放提高药效。在我国，活菌微胶囊技术发明以细菌为主，真菌微胶囊很少，说明我国虫生真菌微胶囊技术还处在初级发展阶段。

申请号为201110457248.7的中国发明专利公开一种白僵菌微胶囊剂技术，由白僵菌分生孢子、高岭土、水制成的菌悬液为囊心，由海藻酸钠为囊壁，在正十六烷、玉米油和卵磷脂不同比例分散剂中分散，通过钙离子进行交联，使微胶囊固化成粒径小于100 μm的具有包膜的微小颗粒。白僵菌分生孢子萌发时芽管可穿破囊壁包膜。该微胶囊剂中还加入了分生孢子萌发营养液，提高了分生孢子的萌发率和萌发速度，可有效阻隔外界紫外线、干旱等不良环境对分生孢子的影响，在相同温度、湿度及紫外线影响下萌发率较高，对农林害虫具有较好的防治效果。

赵军的“球孢白僵菌微胶囊剂的研制”的研究中，以重要茶树小绿叶蝉为目标害虫，筛选出球孢白僵菌菌株，并研制出适用的微胶囊剂型。

真菌的分生孢子对外界环境，如温度、湿度、光照等，较为敏感，真菌杀虫剂剂型的加工要比化学杀虫剂复杂的多。爪哇棒孢霉（Isariajavanicus）是一类重要的虫生真菌，其分布广，寄主多，常用于防治小菜蛾、蚜虫、粉虱等重要害虫。现有技术中还没有针对爪哇棒孢霉的所制备得到的包埋率高、杀虫效果优秀的微胶囊制剂。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有棒孢霉真菌杀虫剂应用技术的不足，提供一种爪哇棒孢霉菌分生孢子微胶囊的制备方法。

本发明的另一个目的是提供上述方法制备得到的爪哇棒孢霉分生孢子微胶囊，所述微胶囊具有潜在和重要的推广应用价值。

本发明的目的是通过以下技术方案予以实现的：

本发明提供了一种爪哇棒孢霉菌分生孢子微胶囊的制备方法，即将爪哇棒孢霉菌Isariajavanicus分生孢子纯粉（简称纯孢粉，其含水量小于3%，分生孢子含量大于5×10¹¹个，下同）、0.05% 吐温80溶液制成的菌悬液与10～20% w/v明胶溶液混合后加入与明胶等质量的10～20% w/v阿拉伯胶溶液进行复凝聚反应，以转谷氨酰胺酶为固化剂进行交联，最后过筛和冷冻干燥得到粒径20～30 μm左右的微胶囊。

本发明针对所要包裹的内含物，即具有生物活性的分生孢子，经过探索性实验选择了等量明胶和阿拉伯胶（简称复合胶）为囊壁；本发明还特别的选择转谷氨酰胺酶代替甲醛作为固化剂，所包裹得到微胶囊不仅包埋率高，且无毒、安全。

上述爪哇棒孢霉菌分生孢子微胶囊的制备方法包括以下步骤：

S1.将爪哇棒孢霉菌纯孢粉与0.05%的吐温80溶液按照质量体积比为1：10（g/mL）的比例混合得到菌悬液；

S2.将菌悬液与10～20% w/v明胶溶液混合后，加入10～20% w/v阿拉伯胶溶液进行复凝聚反应；明胶与阿拉伯胶等质量；

S3.以转谷氨酰胺酶为固化剂进行交联，转谷氨酰胺酶的用量为0.25 g/g明胶；过筛、冷冻干燥得到微胶囊。

优选地，S1所述爪哇棒孢霉菌分生孢子纯粉与复合胶的质量比为 0.5～1.5：10。

优选地，S1所述菌悬液由爪哇棒孢霉菌纯孢粉与0.05% 吐温80溶液通过涡旋搅拌配制而成，所述爪哇棒孢霉菌纯孢粉与吐温80溶液的质量体积比为1：10（g/mL）。