[发明专利]一种治疗心脑血管疾病的中药注射液的指纹图谱测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种治疗心脑血管疾病的中药注射液的指纹图谱测定方法，具体来说是一种用高效液相色谱法指纹图谱方法来测定中药注射液中的有效物质成分，属于医药技术领域。

背景技术

中药注射剂是一个创新剂型，由于具备作用迅速、疗效确切等优点，能弥补传统中药见效慢的缺点，因而发展迅速，目前在心脑血管和抗肿瘤类中成药市场份额中居前10位的产品中，中药注射剂产品已经占有半数，并且已成为中药领域中市场份额最大的剂型。但由于近年来，中药注射液的不良反应报道也逐年增多，为此，建立能够被国际医药行业接受的中药注射液的质量控制体系是目前医药领域的研究热点之一。中药质量控制是中药现代化的重要内容，指纹图谱技术被认为是中药质量控制研究的有效手段。中药指纹图谱能比较全面地反映中药复方中化学物质的种类与数量，且指纹图谱中对多个目标成分尤其是有效成分进行准确定量，尤其对中药注射液进行指纹图谱质量控制显得尤为重要，能更真实反映中药注射液的有效成分数量和含量组成，使得产品质量控制更加准确，进一步保证产品的内在质量。

丹红注射液是由菏泽步长制药有限公司独家生产，在临床中治疗心脑血管疾病效果显著，该制剂是由丹参、红花药材制备而成，具有活血化瘀，通脉舒络的功效。可以用于瘀血闭阻所致的胸痹及中风，并见胸痛，胸闷，心悸，口眼歪斜，言语蹇涩，肢体麻木，活动不利等症；冠心病、心绞痛、心肌梗塞，瘀血型肺心病、缺血性脑病、脑血栓患者。对于该中药注射液我们先申请了公开号CN102233001A的专利，其公开了处方制备工艺及质量检测方法，由于本发明中药注射液有良好的临床效果且市场销售前景广阔，而目前对该制剂的质量标准中仅对丹参素钠、原儿茶醛和总黄酮含量进行控制，这显然对控制中药注射液内在质量是远远不够的。

近年来，指纹图谱技术已经成为中药复方质量控制与评价的重要手段，该技术已经在本领域中运用的比较成熟，成为当下对中药复方质量新的控制点，因此本发明所述的技术方案，意在提高所述产品的质量标准，保证中药注射液质量的安全性和疗效的有效性。

发明内容

本发明目的在于提供一种能够全面、有效、可靠的控制丹红注射液的质量的指纹图谱检测方法，通过该方法获得比较全面的多种成分的指纹图谱信息，从而能为更好评价中药注射液内在质量全面控制提供参考依据。该方法具有简便、准确，重现性及稳定性良好等特点。

本发明本品指所述的中药注射液，均是指由菏泽步长制药有限公司生产的丹红注射液。

该中药注射液具体的制备方法如下：取丹参750g，红花50g，加水煎煮二次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.30(65℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达75～80％，冷藏，取上清液，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.20～1.30(65℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达80～85％，冷藏，取上清液，加入约为投料量1％的活性炭，搅拌30分钟，静置，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加注射用水至配置量，搅匀，加热煮沸40～50分钟，冷藏，滤过，滤液浓缩至配置量的1/3，冷藏，滤过，滤液用NaOH溶液调节pH值至6.5～7.5，加热煮沸40～50分钟，加入约为药液量0.5％的活性炭，搅匀，药液温度降至50℃，静置，滤过，滤液经超滤后，加入约为药液量0.5％的活性炭，滤过，滤液加注射用水至1000ml，调节pH值至6.5～7.5，滤过，灌封，灭菌，即得。

以下是对上述中药注射液该检测方法所建立的指纹图谱测定方法，该方法包括如下的步骤：

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05％三氟乙酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟0.8ml，柱温为40℃；检测波长为288nm。理论板数按丹酚酸A峰计算应不低于200000。

表1各流动相配比表

参照物溶液的制备：取丹参素钠对照品、原儿茶醛对照品、4-香豆酸对照品、迷迭香酸对照品、丹酚酸B对照品和丹酚酸A对照品适量，置棕色量瓶中，精密称定，加0.2％冰乙酸的10％甲醇溶液制成每1ml含丹参素钠0.25mg、原儿茶醛30μg、4-香豆酸10μg、迷迭香酸30μg、丹酚酸B40μg和丹酚酸A30μg的混合溶液，即得。

供试品溶液的制备：精密量取本品2ml，置10ml量瓶中，加0.2％冰醋酸的10％甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法分别精密吸取上述两种溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。