[发明专利]一种抗CD3/抗CD19双特异性抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及抗体药物开发和生产技术领域。具体地，本发明涉及抗CD3/抗CD19双特异性抗体及其应用。

背景技术

B淋巴细胞白血病和恶性淋巴瘤是原发于骨髓造血系统和淋巴结并弥漫全身的恶性肿瘤。传统的放化疗虽然有一定疗效，但没有选择性，对正常组织的损伤很大。近年来，生物治疗方法广泛应用于肿瘤治疗，尤其是单克隆抗体，如rituximab，并因其特异靶向性、高亲和性而收到了良好效果。单抗通过Fc段与效应细胞表面活性受体FcγRⅠ/FcγRⅢ结合，从而介导杀伤作用，但具有免疫杀伤作用的T细胞因为表面缺乏上述受体而不能被有效介导，从而削弱了机体对肿瘤的免疫效应。

双特异性抗体(bispecific T cell engagers，BiTEs)是一种以T细胞作为效应细胞的双特异性单链抗体，它具有两个抗原结合臂，可以同时和T细胞及靶细胞结合，并激活细胞毒性T细胞杀伤病变细胞。和其它双特异性抗体相比，BiTEs的分子柔韧性更好，能更好地促进CD3复合体和肿瘤靶标的连接，并且它不受T细胞受体和靶细胞上MHCⅠ类分子的约束，不需要共刺激分子的参与，是一种极具应用潜力的抗体形式。

BiTEs采用单链抗体技术，将两个不同抗体的重链及轻链可变区连接在一条多肽链上，其基本的形式是V_L1-linker-V_H1-linker-V_H2-linker-V_L2。BiTEs具有两个抗原结合部位，可以同时和T细胞及病变细胞表面的抗原分子结合，从而有效地激活静止的T细胞来达到杀伤病变细胞的目的。由于其独特的结构形式和特性，BiTEs可以用于克服其它双特异性抗体在肿瘤治疗上的缺陷。双特异性抗体是通过鼠源性单克隆抗体的化学偶联、双杂交瘤和基因工程3个发展阶段所制备的一种非天然抗体或抗体杂合分子，随着生物技术的日益进步，国内外双特异性抗体的相关研究日趋深入，其在临床治疗中作为一种新的二次导向系统具有潜在的应用价值。

非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin，s lympho-ma，NHL)是一组起源于淋巴组织并弥漫全身的恶性肿瘤，其发病率和死亡率已居恶性肿瘤第5位。大部分NHL来源于B淋巴细胞(B-NHL)。CD3是T淋巴细胞表面特异分子，通过它可以募集具有杀伤作用的T淋巴细胞，而CD19是B淋巴细胞表面特异标志，分子量为95×10³的穿膜糖蛋白，属于免疫球蛋白超家族成员，与B细胞活化和信号的转导有关，在前B淋巴细胞、未成熟B淋巴细胞、成熟B淋巴细胞、激活的B淋巴细胞中表达，在浆细胞、淋巴多能干细胞以及其他组织中均无表达。大多数NHL起源于B淋巴细胞，95％以上的B细胞NHL表达CD19抗原，且CD19抗原比较暴露，人体血清中也无游离的CD19存在，因此CD19可作为治疗B细胞淋巴瘤的靶点。单抗应用于肿瘤治疗由于其分子量大、半衰期长，很难穿透肿瘤细胞发挥杀伤作用。而微型双特异性抗体具有分子量小、半衰期短且具有较好的肿瘤细胞穿透性，本身细胞毒作用低。T细胞表面抗原CD3和肿瘤细胞表面相关表达抗原的双特异性微型抗体介导的抗肿瘤治疗，以及体外致敏的树突状细胞(dendritic cells，DCs)诱导的相对特异的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte，CTL)对肿瘤的杀伤等，被认为是传统的手术治疗、放化疗方法之外最有希望清除残余肿瘤细胞和微小转移病灶从而根治肿瘤的辅助治疗措施，许多动物实验和临床试验已经证实了该生物治疗措施的疗效。

本发明的抗CD3/抗CD19双特异性抗体是在抗CD3scFv和抗CD19scFv载体基础上构建而成。CD19是较为理想的肿瘤相关抗原，它表达于除干细胞以外的B淋巴细胞发育的各个阶段，因此B细胞来源的恶性细胞均有CD19表达，CD3是T淋巴细胞表面特异分子。因此本发明提供了一种新型抗CD3/抗CD19双特异性抗体的构建，以期能够获得比已有抗CD3/抗CD19双特异性抗体家族的其他抗体更好的通过桥接作用介导T细胞高效特异杀伤B淋巴细胞来源的肿瘤细胞。

发明内容

本发明构建了大容量的天然人源噬菌体抗体库，从中筛选获得了全人源抗CD3单链抗体和抗CD19单链抗体。