[发明专利]一种用于检测褶牡蛎嗜酸性和嗜碱性粒细胞吞噬力的方法

权利要求书

1.一种用于检测褶牡蛎嗜酸性和嗜碱性粒细胞吞噬力的方法，包括：

(1)取褶牡蛎，从闭壳肌中抽取血淋巴与抗凝剂混匀，离心后PBS重悬血细胞沉淀，并调节细胞浓度，得到褶牡蛎血细胞悬液；

(2)将步骤(1)的血细胞悬液与荧光微球处理液混匀，35～40℃避光孵育1～2h；离心、洗涤、重悬，得到吞噬后的血细胞悬液；

(3)将步骤(2)的血细胞悬液与中性红染液混匀，室温避光染色30～40min；离心、洗涤、重悬，得到中性红染色后的血细胞悬液；

(4)将步骤(3)的血细胞悬液与丙酮混匀，室温固定5～10min；离心，去除上清液，血细胞沉淀用碘化丙啶溶液重悬，室温孵育15～20min；离心、洗涤、重悬，得到碘化丙啶衬染的血细胞悬液；

(5)取步骤(4)的血细胞悬液滴加于载玻片上，分别观察吞噬细胞和吞噬微球，拍照，统计吞噬细胞数和吞噬微球数分析褶牡蛎嗜酸性和嗜碱性粒细胞的吞噬力。

2.根据权利要求1所述的一种用于检测褶牡蛎嗜酸性和嗜碱性粒细胞吞噬力的方法，其特征在于：所述步骤(1)中的抗凝剂的组成为葡萄糖20.8g，柠檬酸钠8.0g，EDTA3.36g，氯化钠22.3g，蒸馏水1000ml，pH7.2。

3.根据权利要求1所述的一种用于检测褶牡蛎嗜酸性和嗜碱性粒细胞吞噬力的方法，其特征在于：所述步骤(2)中的荧光微球处理液的制备方法为：荧光微球悬液与3.0％牛血清白蛋白溶液按体积比1:100混匀，室温避光超声处理15～20min。

4.根据权利要求1所述的一种用于检测褶牡蛎嗜酸性和嗜碱性粒细胞吞噬力的方法，其特征在于：所述步骤(3)中的中性红染液的制备方法为：用PBS将中性红按质量比100:1溶解，经滤纸过滤后即得中性红储备液；使用时，将储备液用PBS作10倍稀释。

5.根据权利要求1所述的一种用于检测褶牡蛎嗜酸性和嗜碱性粒细胞吞噬力的方法，其特征在于：所述步骤(2)、(3)和(4)中的洗涤和重悬采用PBS。

6.根据权利要求1所述的一种用于检测褶牡蛎嗜酸性和嗜碱性粒细胞吞噬力的方法，其特征在于：所述步骤(4)中的碘化丙啶溶液浓度为0.5mg/ml。

7.根据权利要求1所述的一种用于检测褶牡蛎嗜酸性和嗜碱性粒细胞吞噬力的方法，其特征在于：所述步骤(5)中的拍照是通过原位拍摄明视野和荧光视野，其中荧光视野是通过将蓝色和绿色荧光视野的照片叠加而成。