[发明专利]一种易感基因SNP位点检测方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程领域，更具体地说，涉及一种易感基因SNP位点检测方法及试剂盒。

背景技术

单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphism，SNP）是指基因组内DNA中某一特定核苷酸位置上存在转换、颠换、插入、缺失等变化。目前，国内外已有的易感基因SNP位点检测方法有sanger测序法、基于芯片技术的SNP分型方法、等位基因特异性扩增法（Amplification Refractory Mutation System Real Time PCR，ARMS-RT PCR）和Taqman荧光探针法等。

其中，基于芯片技术的SNP分型方法因为能够同时检测多个SNP位点，通量相对较高等优点最为常用，其原理是将大量的探针分子固定在支持物上，然后使这些探针与带标记的样品分子进行杂交，并在除去未结合的分子后，通过检测每个探针分子的杂交信号强度，即每个探针分子所结合的样品分子的标记的信号强度，来判断样品分子的SNP情况。但是这种方法对探针的设计要求高，容易出现高背景值，特别是在同时进行多个易感基因的多个SNP位点检测时，不同探针之间的相互干扰现象非常常见。因此，基于芯片技术的SNP分型方法的探针设计难度高，通量和准确性受限于探针的设计而偏低，且准确性随着通量的增加急剧下降，使得易感基因SNP位点检测的准确性和通量得不到保证。

因此，需要一种新的能够高通量的对易感基因SNP位点进行检测方法。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种能够准确的对易感基因SNP位点进行检测方法，旨在解决现有技术中易感基因SNP位点检测方法通量低的问题。

为了实现发明目的，本发明的易感基因SNP位点检测方法，包括以下步骤：

A.利用特异性引物对对待测样本进行非单分子扩增，将扩增产物可寻址的固定在固相载体上；

B.对固定在固相载体上的扩增产物中的易感基因待测SNP位点进行测序，进而确定易感基因待测SNP位点的基因型。

其中，所述扩增产物通过微球间接的可寻址固定在固相载体上。

其中，所述步骤A包括以下步骤：

A1、利用特异性引物对对待测样本进行非单分子扩增，得扩增产物；

A2、将扩增产物与接头连接，得连接产物；

A3、将连接产物固定在微球上，然后将微球可寻址的固定在固相载体上。

其中，所述步骤A包括以下步骤：

A1、利用特异性引物对对待测样本进行非单分子扩增，得扩增产物；

A2、将扩增产物与固定在微球上的接头连接，得被固定在微球上的连接产物；

A3、将固定有连接产物的微球可寻址的固定在固相载体上。

其中，所述步骤A包括以下步骤：

A1、利用特异性引物对对待测样本进行非单分子扩增，得固定在微球上的扩增产物；所述特异性引物对中仅有一种引物被预先固定在微球上；

A2、将固定有扩增产物的微球可寻址的固定在固相载体上。

上述任一方案中，所述易感基因待测SNP位点有多个，所述步骤A为：利用多种特异性引物对对待测样本进行非单分子扩增，得多种含不同易感基因待测SNP位点的扩增产物，进而将这些扩增产物分别可寻址的固定在固相载体上。

优选的，所述含不同易感基因待测SNP位点的扩增产物均连有标签序列；所述标签序列用于识别易感基因待测SNP位点的类型。

上述任一方案中，所述待测样本有多个；所述步骤A为：利用特异性引物对对多个待测样本进行非单分子扩增，得多种含不同易感基因待测SNP位点的扩增产物，进而将这些扩增产物分别可寻址的固定在固相载体上；所述各样本的含易感基因待测SNP位点的扩增产物均连有标签序列；所述标签序列用于识别不同的待测样本。

上述任一方案中，所述待测样本有多个；所述易感基因待测SNP位点有多个；所述步骤A为：

利用多种特异性引物对分别对多个待测样本进行非单分子扩增，得多种不同待测样本来源的含不同易感基因待测SNP位点的扩增产物，进而将这些扩增产物分别可寻址的固定在固相载体上；

所述多种不同待测样本来源的含不同易感基因待测SNP位点的扩增产物均连有标签序列；所述标签序列用于识别不同的待测样本和易感基因待测SNP位点的类型。

其中，所述标签序列来源于特异性引物对或与扩增产物连接的接头。

其中，所述特异性引物对中的至少一种引物上含有归一化序列；或所述接头中含有归一化序列。