[发明专利]一种易感基因SNP位点检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种易感基因SNP位点检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

A.利用特异性引物对对待测样本进行非单分子扩增，将扩增产物可寻址的固定在固相载体上；

B.对固定在固相载体上的扩增产物中的易感基因待测SNP位点进行测序，进而确定易感基因待测SNP位点的基因型；

所述测序方法为第二代高通量基因测序技术。

2.根据权利要求1所述的易感基因SNP位点检测方法，其特征在于，所述扩增产物通过微球间接的可寻址固定在固相载体上。

3.根据权利要求2所述的易感基因SNP位点检测方法，其特征在于，所述步骤A包括以下步骤：

A1、利用特异性引物对对待测样本进行非单分子扩增，得扩增产物；

A2、将扩增产物与接头连接，得连接产物；

A3、将连接产物固定在微球上，然后将微球可寻址的固定在固相载体上；

所述特异性引物对中，仅用于扩出易感基因待测SNP位点所在链的引物的5’端含有磷酸基团。

4.根据权利要求2所述的易感基因SNP位点检测方法，其特征在于，所述步骤A包括以下步骤：

A1、利用特异性引物对对待测样本进行非单分子扩增，得扩增产物；

A2、将扩增产物与固定在微球上的接头连接，在连接过程中，使整个连接反应体系周期性震荡，得被固定在微球上的连接产物；

A3、将固定有连接产物的微球可寻址的固定在固相载体上。

5.根据权利要求2所述的易感基因SNP位点检测方法，其特征在于，所述步骤A包括以下步骤：

A1、利用特异性引物对对待测样本进行非单分子扩增，得固定在微球上的扩增产物；所述特异性引物对中仅有一种引物被预先固定在微球上，在扩增反应过程中，使整个扩增反应体系周期性震荡；

A2、将固定有扩增产物的微球可寻址的固定在固相载体上。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的易感基因SNP位点检测方法，其特征在于，所述待测样本有多个；所述易感基因待测SNP位点有多个；所述步骤A为：

利用多种特异性引物对分别对多个待测样本进行非单分子扩增，得多种不同待测样本来源的含不同易感基因待测SNP位点的扩增产物，进而将这些扩增产物分别可寻址的固定在固相载体上；

所述多种不同待测样本来源的含不同易感基因待测SNP位点的扩增产物均连有标签序列；所述标签序列用于识别不同的待测样本和易感基因待测SNP位点的类型。

7.根据权利要求6所述的易感基因SNP位点检测方法，其特征在于，所述标签序列来源于特异性引物对或与扩增产物连接的接头。

8.根据权利要求7所述的易感基因SNP位点检测方法，其特征在于，所述特异性引物对中的至少一种引物上含有归一化序列；或所述接头中含有归一化序列。

9.根据权利要求1所述的易感基因SNP位点检测方法，其特征在于，所述步骤B中的测序方法为连接测序法或合成测序法。

10.根据权利要求9所述的易感基因SNP位点检测方法，其特征在于，所述步骤B进行测序反应时的锚定引物为易感基因待测SNP位点所在位置的3’端的互补序列或易感基因待测SNP位点所在位置的5’端的互补序列。

11.一种用于第二代高通量基因测序技术的易感基因SNP位点检测试剂盒，其特征在于，包括：特异性引物对和固相载体；

所述特异性引物对，用于通过非单分子扩增获得含易感基因待测SNP位点的核酸片段；

所述固相载体，用于可寻址固定含易感基因待测SNP位点的核酸片段。

12.根据权利要求11所述的易感基因SNP位点检测试剂盒，其特征在于，还包括接头，所述接头用于连接含易感基因待测SNP位点的核酸片段，所述接头上含有修饰标记，用于使含易感基因待测SNP位点的核酸片段通过接头间接固定在固相载体上。

13.根据权利要求11所述的易感基因SNP位点检测试剂盒，其特征在于，还包括锚定引物，所述锚定引物为特异性引物对中的一段序列；或

特异性引物对中的一段序列的互补序列；或

易感基因待测SNP位点所在位点的3’端的互补序列；或

易感基因待测SNP位点所在位点的5’端的互补序列。