[发明专利]HIF2A基因突变体及其检测与应用

说明书

技术领域

本发明涉及医学分子生物学领域，具体地，涉及分离的HIF2A突变体的核酸，分离的多肽，以及筛选易感肝癌及其他肝脏相关疾病的生物样品的方法和用于筛选易感肝癌和其他肝脏相关疾病的生物样品的试剂盒。

背景技术

肝癌的发生是环境和基因共同作用的结果，它是最常见的恶性肿瘤之一，在世界范围内肿瘤相关性死亡因素中排名第三，有资料表明，全球每年有超过50万新患者。全世界50％以上的新发和死亡肝癌患者发生在中国，仅我国每年就有约11万人死于肝癌。而肝癌起病隐匿，超过60％的肝癌患者在初次就诊时就已进入中晚期，失去根治治疗的机会，5年总体生存率只有7％左右[Lin H,Yan J,Wang Z,et al.Loss of Immunity-supported senescence enhances susceptibility to hepatocellular carcinogenesis and progression in TLR2-deficient mouse.Hepatology,2013,57(1)：171-82.]。手术切除仍是治疗原发性肝癌的首选，但是众所周知，根治性切除后患者的5年复发率高、转移率高[于秀石，关媛媛，田菊霞.肝癌发生的相关分子机制研究.健康研究(基础理论研究)，2010，30(5)：391-393.]。因此寻找实用有效的肝癌易感性筛查、早期诊断、治疗、预后判断的指标早已十分迫切。

随着肿瘤分子生物学理论和技术的飞速发展，对各种肝癌相关基因的认识不断深入，且原癌基因、抑癌基因、毒物代谢酶基因、DNA修复基因等的基因突变与肝癌易感性关系的研究也不断深入[郑霄雁，史习舜，胡志坚.肝癌相关基因突变与肝癌易感性的研究.中国肿瘤，2008，17(5)：390-395.]，但是目前发现的肝癌相关基因的数量有限，且到目前为止，并没有十分理想的肝癌筛查、诊断、治疗、预后判断等的基因。因此，寻找可能的肝癌诱发基因，从而找出可靠的肝癌易感性筛查、早期诊断的指标以及肝癌预后判断的新依据，仍然是当今肝癌研究的热点。

发明内容

本发明要解决的技术问题是，克服现有技术中的不足，提供一种HIF2A基因突变体及其检测与应用。

为解决技术问题，本发明的解决方案是：

提供一种分离的编码HIF2A突变体核酸，该突变体核酸的基因序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明进一步提供了一种分离的HIF2A突变体多肽，该突变体多肽是由权利要求1所述突变体核酸编码的，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

本发明进一步提供了一种检测生物样品是否存在HIF2A基因突变的方法，包括以下步骤：

(1)确定在生物样品中是否具备HIF2A基因编码的SEQ ID NO：2所示的第549位氨基酸，或者SEQ ID NO：1所示的第2155位核苷酸；

该步骤具体包括：利用HIF2A基因的第12外显子特异性的引物，对核酸样本进行PCR扩增，针对所得的扩增产物构建核酸测序文库并进行测序；

所述的生物样品是指分离自人体的血液、各种器官的组织、皮肤、毛发或口腔黏膜，能够用于分离获得权利要求1中所述突变体核酸，或者是通过反转录反应获得cDNA样本以构成所述核酸样本；

所述HIF2A基因的第12外显子特异性的引物具有如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列；

(2)检测在所述核苷酸位置是否存在G→A突变，以及所述氨基酸序列是否存在E→K突变；

该步骤具体包括：通过比对测序核苷酸图谱，第2155位核苷酸由G变为A，CDS编码序列上看是第1645位核苷酸发生突变，即发生c.G1645A突变，密码子GAG变为AAG，翻译后氨基酸序列第549个谷氨酸(E)变为赖氨酸(K)，即发生p.E549K突变。

本发明进一步提供了所述编码HIF2A突变体核酸在制备用于检测生物样品是否存在HIF2A基因突变的试剂盒中的应用。

本发明进一步提供了所述编码HIF2A突变体多肽在制备用于检测生物样品是否存在HIF2A基因突变的试剂盒中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：