[发明专利]一种嗜热链球菌冻干菌粉制备方法

说明书

技术领域

本发明属于嗜热链球菌制品生产技术领域，涉及一种嗜热链球菌冻干菌粉制备方法。

背景技术

嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)是发酵生产乳制品的重要乳酸菌之一，其在发酵过程中，除进行产酸代谢外，还产生2,3-丁二酮等酸奶特有的风味物质，还能促进保加利亚乳杆菌的生长，同时也是重要的益生菌之一，其具有调节人体胃肠道菌群平衡、抗突变、增强免疫力等能力。

在发酵剂制备过程中，常用的是真空冷冻干燥法，菌种在真空冷冻干燥后：酶的活性丧失少、冻干燥菌粉复水性好、脱水彻底、保存期长、储存运输和使用都很方便，为直投式发酵剂提供良好的基础。但是，在实际的使用时，冷冻干燥过程中水的结晶、细胞的失水、蛋白失活等情况使得菌体出现死亡或损伤，对于菌种的保存、生产使用非常不利。因此需要对菌粉制备方法进行改进。

对于嗜热链球菌冻干菌粉制备的改进方法有很多种，如进行增殖培养、抗冻因子添加、保护剂配方的制备等。如专利CN102952771B公开了一种嗜热链球菌冻干保护剂和制备方法，其冻干保护剂配方如下：脱脂乳粉10-20份、棉籽糖3-10份、大豆低聚糖4-10份、右旋糖酐D401.5-5.0份、三磷酸钠0.3-0.8份、没食子酸丙酯0.005-0.02份、蒸馏水100份。专利CN100429980C公开了一种直投式酸奶发酵剂的生产方法，其培养基配方为(质量百分比)：脱脂乳粉0.1-15％、乳清粉0.1-10％、酵母膏0.1-5％、番茄汁1-10％，其余为水；其保护剂配方为(质量百分比)：谷氨酸钠0.1-5.0％、乳糖0.1-8.0％、甘油0.1-5.0％、聚乙烯吡咯烷酮0.1-3.0％、Vc0.1-5％。专利CN101502287B也公开了一种直投式酸奶发酵剂的制备方法，其所使用的培养基为(质量百分比)：1-2％葡萄糖、0.5-1％蛋白胨、0.1-10％乳清粉、1-5％酵母膏、0.1-0.5％柠檬酸二铵、0.01-0.2％磷酸氢二钾、0.1-0.5％无水乙酸钠；其所使用的保护剂为：重量百分比1-30％的奶粉及0.1-2％的抗氧化剂(异维生素C或谷氨酸或甘氨酸)。CN103404703A公开了一种稳定安全的嗜热链球菌活菌制剂及其制备方法，其培养基配方为：酵母膏7.5g、蛋白胨7.5g、葡萄糖10g、KH₂PO₄2g、西红柿汁100mL、Tween800.5mL、蒸馏水900mL。专利CN102766590B公开了一种嗜热链球菌增菌培养基及制备方法，其配方如下：葡萄糖0.8-1.2g、酵母膏0.5-1.0g、大豆蛋白胨0.5-1.0g、番茄汁8-12mL、低聚木糖0.2-0.4g、水88-92mL、KH₂PO₄0.1-0.2g和吐温800.01-0.05mL。CN102978150A公开了一种嗜热链球菌复合抗冻因子，其配方如下(以质量份数计)：甜菜碱0.1-0.4份、氯化钠3-5份、甘露糖0.5-3份和碳酸钙0.1-0.4份。另外有许多研究文献也公开了嗜热链球菌的菌粉制备方法，如“嗜热链球菌的筛选及其高活性菌粉制备”中研究得到的增殖培养基配方为：酵母粉0.5％、番茄汁7.5％、麦芽汁7.5％、乳清粉7.5％；保护剂配方为：海藻糖20％、乳糖2.5％、谷氨酸钠5％、甘油0.5％。

冻干保护剂的使用极大地提高了菌体在真空冷冻干燥下的存活率和冻干菌粉的稳定性，而在培养基中添加一些可以促进细胞产生抗冻效果的分子物质也有利于其冻干菌粉的制备。这些物质的添加也可改变嗜热链球菌细胞膜脂肪酸组成，甚至诱导细胞产生大量的抗冻蛋白，从而有效提高嗜热链球菌菌体的抗冷冻能力，可以达到减少甚至避免菌体冻干损伤、提高活菌存活率和菌粉活菌数、减少复合冻干保护剂的添加量、延长冻干嗜热链球菌菌粉常温保存期的目的。

白扁豆、薏苡仁和山药作为卫生部颁布的“药食同源”药物，其所含的多糖对人体具有抗氧化、抗肿瘤、降血脂、增强免疫力等作用，此外，这些多糖还可以有效刺激乳酸菌的菌体增殖，也可以作为抗冻因子，并且在冻干保护方面也具有良好效果。目前，使用这一类型多糖在冻干菌粉制备方面的报道和发明专利极少。

发明内容

本发明的目的是提供一种更好地开发利用我国中药资源作为冻干保护剂、提高菌体抗冻能力的嗜热链球菌冻干菌粉制备方法。

本发明的技术方案包括以下步骤：

a)菌种活化与增殖培养：将嗜热链球菌菌种接种到M17液体培养基中活化，将已活化的菌种接种于增殖抗冻培养基中增殖培养，得到增殖的菌液；