[发明专利]沙门氏菌检测方法及检测用培养基

说明书

技术领域

本发明涉及一种沙门氏菌检测方法及检测用培养基，属于微生物检验领域。

背景技术

目前，美国FDA、AOAC、ISO和中国国标等的食品中的沙门氏菌检测基准方法都是以预增菌、增菌、分离和鉴定为基本程序，但在各种培养基上略有区别。但这些基准方法都比较耗费时间、人力和物力。为了节约人力和时间，科研人员研发了很多快速检测方法，原理基本上都是以PCR和抗原抗体反应为基础，在一些领域发挥了重要作用，但是在某些方面不可替代分离培养方法，原因为：1、无论PCR和抗原抗体，只能针对有限的目标基因或抗原，其在沙门氏菌2000多种血清型的覆盖度上与分离培养法无法比拟，即敏感性方面逊于分离培养法，因此无法撼动分离培养法作为沙门氏菌检测金标准的地位；2、某些重要项目上，取得活菌是确凿证据；3、需要活菌进行进一步分析的时候。

关于以分离培养为基础的方法，AOAC也验证了一些新的方法，如MSRV(改良半固体Rappaport-Vassiladis)培养基培养法，以沙门氏菌选择性增菌剂Rappaport-Vassiladis(RV)肉汤为基础改进而成，该方法应用于可可制品和奶制品中的沙门氏菌分离。MSRV方法主要步骤是将样本经缓冲蛋白胨水(BPW)预增菌及四磺酸钠煌绿肉汤(TTB)和RV肉汤增菌后，分别吸取数滴接种于MSRV半固体平板，待沙门氏菌运动生长产生晕圈后挑取该培养物继续进行鉴定和分离。

专利ZL201210006404.2(公开号102517375A)公开了一种利用毛细管培养法检测微生物的方法，建立了毛细管培养检测微生物的基本程序和方法。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种沙门氏菌检测方法，及检测用培养基，其可用于检测或筛选多种样本中的沙门氏菌，具有快速、高效、省时省力、特异性好、敏感性强等优点。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种沙门氏菌检测方法——毛细管培养法，步骤如下：

(一)填装毛细管：以内径为0.5～5mm、长度3～10cm的直管毛细管(优选内径1mm、长度5cm的直管毛细管)为容器，装载MSTT培养基(该培养基为本发明独创的培养基，具体组成及制备方法见下述)或改良半固体Rappaport-Vassiladis(MSRV)培养基(该培养基为现有技术中已有的常规培养基)；

所述毛细管的材质为玻璃、透明塑料或透明合成树脂中的任一种；

(二)检测：进行以下两种操作之一，或以下两种操作都进行：

(1)将上述填装培养基后的毛细管的一端接入待检样本(液态样本)、待检样本的稀释液、含有待检样本的预增菌液或含有待检样本的增菌液中，另一端密封或接入培养基(该培养基与毛细管内填装的培养基相同)中；若毛细管中接入的培养基为MSTT培养基，则培养16<t≤48h后，进行观察；若毛细管中接入的培养基为MSRV培养基，则培养30<t≤72h后，进行观察；

(2)将待检样本(液态样本)、待检样本的稀释液、含有待检样本的预增菌液或含有待检样本的增菌液接种到四硫磺酸钠煌绿肉汤(TTB)、Muller-Kauffmann四硫磺酸钠新生霉素(MKTTn)肉汤、Rappaport-Vassiladis胰蛋白胨(RVS)肉汤、Rappaport-Vassiladis(RV)肉汤或亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液中，得接种液；然后将上述填装培养基后的毛细管的一端接入接种液中，另一端密封或接入培养基(该培养基与毛细管内填装的培养基相同)中；若毛细管中接入的培养基为MSTT培养基，则培养16<t≤48h后，进行观察；若毛细管中接入的培养基为MSRV培养基，则培养30<t≤72h后，进行观察；

所述观察是指：观察毛细管内、毛细管密封端、毛细管接入培养基的一端或毛细管所接入的培养基，观察是否有晕环，有晕环者为疑似阳性结果，表明待检样本中可能含有沙门氏菌；无晕环者为阴性结果，表明待检样本中不含有沙门氏菌；

所述密封是指用气密性橡胶或气密性硅胶帽直接密封；

所述培养基(指接入毛细管的培养基)盛放在1～10mL容量的管制瓶或1～10mL容量的透明塑料瓶中(优选1mL玻璃管制瓶)，管制瓶或透明塑料瓶用气密性橡胶塞或气密性硅胶塞密封，毛细管穿过该硅胶塞或橡胶塞，以保证气密性。

进一步地，还包括以下步骤：