[发明专利]CS/IL-GR修饰的牛血清白蛋白分子印迹电极的制备及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种电化学传感器，尤其涉及CS/IL-GR修饰的牛血清白蛋白分子印迹电极的制备及其应用。

背景技术

分子印迹电化学传感器(MIECS)结合电化学传感器和分子印迹技术，以分子印迹聚合物作为生物识别元件来提高电化学传感器的灵敏度和选择性，目前已被成功用于印迹生物小分子。与此同时，印迹生物大分子尤其是印迹蛋白质分子，并将其应用于电化学检测引起了研究者们越来越多的关注。但是印迹蛋白质分子的电化学传感器或生物传感器的灵敏度，由于受到蛋白质分子尺寸大、结构多变和较低的再键合效率等限制，研究进展缓慢。

石墨烯(GR)由于比表面积大、电催化性能优异及生物相容性好，因而常被用来作为生物传感界面来制备性能优良的电化学生物传感器。离子液体(ILs)是由有机阳离子和阴离子组成的液体稳态盐，由于离子导电性高和生物相容性良好已经在电化学生物传感器中被广泛用于提高电化学响应，目前，已有报道IL-GR复合物在制备电化学传感器方面表现出更优异的性能，并已成功地用于制备MIECS。

壳聚糖(CS)，(1,4)-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-葡聚糖，是由甲壳素经过脱乙酰作用后形成的一种天然高分子。壳聚糖分子中含有大量性质活泼的氨基和羟基，利用壳聚糖丰富的-OH或-NH₂与蛋白质分子中的-COOH通过氢键作用相结合，来达到在电极表面固定蛋白质分子的目的。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了CS/IL-GR修饰的牛血清白蛋白分子印迹电极的制备及其在检测牛血清白蛋白(BSA)的应用，所制备的蛋白质分子印迹电化学传感器具有高灵敏度、高选择性和稳定性，具有良好的临床应用价值。

本发明是通过以下技术方案实现的：

CS/IL-GR修饰的牛血清白蛋白分子印迹电极的制备，其步骤如下：

(1)CS/IL-GR/GCE的制备：

将玻碳电极在金相砂纸上打磨，然后在麂皮上依次用0.3μm和0.05μm Al₂O₃粉抛光成镜面，用二次水冲洗电极表面，将冲洗后的电极在二次蒸馏水和乙醇中超声洗涤20s，室温下晾干备用；

将250μL的BmimPF₆溶于已分散好的1.0mg/mL石墨烯水溶液中，超声分散均匀，制得离子液体-石墨烯复合物(IL-GR)溶液；然后在处理好的玻碳电极表面滴涂5.0μL的IL-GR水溶液，晾干后即得到IL-GR/GCE电极；

再在IL-GR/GCE电极表面滴涂5.0μL的含4％(w/V)壳聚糖的2％(V/V)的乙酸溶液，晾干，得壳聚糖修饰的IL-GR/GCE，即CS/IL-GR/GCE；

(2)MIPs/CS/IL-GR/GCE的制备

首先，将步骤(1)所得电极CS/IL-GR/GCE浸入含有1.0g/L BSA和吡咯单体的除氧磷酸盐缓冲液，在-0.2～1.2V电位范围内，以100mV/s的扫速循环伏安扫描至稳定，然后取出晾干，得到聚合物修饰的CS/IL-GR/GCE，即BSA@MIPs/CS/IL-GR/GCE；然后，将含有模板分子的印迹电极BSA@MIPs/CS/IL-GR/GCE浸入1.0M H₂SO₄溶液中，洗脱模板分子BSA，得到MIPs/CS/IL-GR/GCE；为了作为比较，采用上述方法用不同的修饰电极分别制备了BSA@MIPs/CS/GR/GCE电极和BSA@MIPs/CS/IL/GCE电极。

步骤(2)所述除氧磷酸盐缓冲液的pH＝7.0。

本发明还提供一种利用上述方法制备的分子印迹电极MIPs/CS/IL-GR/GCE。