[发明专利]用于蝇蛹金小蜂多样性分析的微卫星引物及其用途和分析方法

说明书

技术领域

本发明涉及昆虫进化领域，具体涉及一种用于蝇蛹金小蜂多样性分析的微卫星引物及其用途和分析方法，可用于蝇蛹金小蜂群体遗传多样性分析。 

背景技术

寄生蜂是害虫的重要天敌组成，在控制害虫种群密度中起着重要的调控作用。在生产实践中，应用并适当维护寄生蜂的密度，可长期将害虫种群密度控制在一定阈值以内。充分发挥生物防治不污染环境，不杀伤天敌，且具有持续控灾效果的优势，可以达到保护生态环境，保护生物多样性，持续控制虫害的目标。蝇蛹金小蜂Pachycrepoideus vindemmiae(Rondani)是家蝇、实蝇和果蝇等蝇类蛹期常见寄生蜂种类，属于小蜂总科Chalcidoidea，金小蜂科Pteromalidae，金小蜂亚科Pteromalinae，在对蝇类害虫的生物防治上起着非常重要的作用，具有很大的利用潜力。家蝇是重要的卫生害虫，在我国广泛分布，严重威胁食品和卫生安全；果蝇和实蝇是樱桃、杨梅、柑橘、苦瓜等果蔬上的重要害虫，严重影响到果蔬的安全生产和销售。 

微卫星DNA又称简单序列重复(Simple Sequence Repeats，SSR)和短串连重复(Short Tandem Repeats,STRs)，一般以2-6个碱基为核心序列，首尾相连组成的串联重复序列。微卫星DNA序列被分为3种类型：单一型(pure)、复合型(compound)和间断型(interrupted)。重复序列两侧的DNA序列保守性很强。这种串联重复序列存在于几乎所有真核生物的基因组中，且呈随机均匀分布。它们不仅大量分布于基因的间隔区和内含子中，而且还分布于基因的外显子和调控区(如启动子、增强子)。例如，完整的人类基因组序列显示，微卫星标记约占3％。在染色体上，除着丝粒及端粒区域外，其它区域均广泛分布有微卫星位点。其重复单位数目的改变可以引起相当高的多态性，但突变率仅为0.5×10^-4—5.0×10^-4，在谱系中可以稳定地遗传，是一种很好的遗传标志。到目前为止，国际上还没有一套用以分析蝇蛹金小蜂遗传结构的微卫星引物。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于蝇蛹金小蜂多样性分析的微卫星引物及其用途和分析方法，并进一步给出了应用该引物的PCR测定方法。具体技术方案如下： 

一种用于蝇蛹金小蜂多样性分析的微卫星引物，其核苷酸序列为： 

BL1F：GGGGTGTGTGAGATAACGC，BL1R：GGAGGCGAAATTTGTTGCT； 

BL2F：CGTCCATTGGAGAGACATCG，BL2R：TGTATATCGCGCACGGACC； 

BL3F：AGCCATCGTGATTTCTCCG，BL3R：CGATACACGCGCGTCTATTC； 

BL4F：AGCGAGCAAAGGTAGTGGTG，BL4R：CACCGACCATCGTCATTATCT； 

BL5F：CGACGTAAAAAGTCATTACGAGTC，BL5R：ATTTCCAATTTGGCACGGTC； 

BL6F：GCATCGTCTCCTGAACAATC，BL6R：GATACCACTCGCACGAGGT； 

BL7F：GCGAAGGTGAAACGGAGAA，BL7R：ATAGGCATACGTGCGACAGC； 

BL8F：CGTTTCTGTTTGTCATCGACAG，BL8R：AGATGGTTCGGCGATAAAGA； 

BL9F：TCAGCATTAAATGGCGTCG，BL9R：CACTTGAGCGCGTTCAATC； 

BL10F：GTCTGCCTCGTCTCGGATT，BL10R：AGCGAGCGAGTGAGAGAGTAAG。 

进一步地， 

引物BL1重复基序为(TC)12，溶解温度Tm为55.5℃，扩增片段大小为162-174； 

引物BL2重复基序为(CT)11，溶解温度Tm为55.7℃，扩增片段大小为156-169； 

引物BL3重复基序为(TC)13，溶解温度Tm为55.4℃，扩增片段大小为166-182； 

引物BL4重复基序为(AG)10TA(AG)7，溶解温度Tm为51.7℃，扩增片段大小为211-215； 

引物BL5重复基序为(AG)8，溶解温度Tm为52.9℃，扩增片段大小为130-149；