[发明专利]用于蝇蛹金小蜂多样性分析的微卫星引物及其用途和分析方法有效
申请号: | 201410166679.1 | 申请日: | 2014-04-23 |
公开(公告)号: | CN103981257A | 公开(公告)日: | 2014-08-13 |
发明(设计)人: | 胡好远;陈伟;方磊;刘佳璐;贺张 | 申请(专利权)人: | 安徽师范大学 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12N15/11 |
代理公司: | 芜湖安汇知识产权代理有限公司 34107 | 代理人: | 朱圣荣 |
地址: | 241000 安徽省*** | 国省代码: | 安徽;34 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 用于 金小蜂 多样性 分析 卫星 引物 及其 用途 方法 | ||
1.一种用于蝇蛹金小蜂多样性分析的微卫星引物,其特征在于,其核苷酸序列为:BL1F:GGGGTGTGTGAGATAACGC, BL1R:GGAGGCGAAATTTGTTGCT;
BL2F:CGTCCATTGGAGAGACATCG, BL2R:TGTATATCGCGCACGGACC;
BL3F:AGCCATCGTGATTTCTCCG, BL3R:CGATACACGCGCGTCTATTC;
BL4F:AGCGAGCAAAGGTAGTGGTG, BL4R:CACCGACCATCGTCATTATCT;
BL5F:CGACGTAAAAAGTCATTACGAGTC, BL5R:ATTTCCAATTTGGCACGGTC;
BL6F:GCATCGTCTCCTGAACAATC, BL6R:GATACCACTCGCACGAGGT;
BL7F:GCGAAGGTGAAACGGAGAA, BL7R:ATAGGCATACGTGCGACAGC;
BL8F:CGTTTCTGTTTGTCATCGACAG, BL8R:AGATGGTTCGGCGATAAAGA;
BL9F:TCAGCATTAAATGGCGTCG, BL9R:CACTTGAGCGCGTTCAATC;
BL10F:GTCTGCCTCGTCTCGGATT, BL10R:AGCGAGCGAGTGAGAGAGTAAG。
2.如权利要求1所述的用于蝇蛹金小蜂多样性分析的微卫星引物,其特征在于,引物BL1重复基序为(TC)12,溶解温度Tm为55.5℃,扩增片段大小为162-174;
引物BL2重复基序为(CT)11,溶解温度Tm为55.7℃,扩增片段大小为156-169;
引物BL3重复基序为(TC)13,溶解温度Tm为55.4℃,扩增片段大小为166-182;
引物BL4重复基序为(AG)10TA(AG)7,溶解温度Tm为51.7℃,扩增片段大小为211-215;
引物BL5重复基序为(AG)8,溶解温度Tm为52.9℃,扩增片段大小为130-149;
引物BL6重复基序为(AG)11,溶解温度Tm为51.8℃,扩增片段大小为128-174;
引物BL7重复基序为(AG)9,溶解温度Tm为53.7℃,扩增片段大小为157-167;
引物BL8重复基序为(AG)10,溶解温度Tm为53.0℃,扩增片段大小为155-177;
引物BL9重复基序为(GA)11,溶解温度Tm为54.4℃,扩增片段大小为172-184;
引物BL10重复基序为(GA)11,溶解温度Tm为55.7℃,扩增片段大小为282-292。
3.如权利要求1和2所述用于蝇蛹金小蜂多样性分析的微卫星引物的用途,其特征在于,用于蝇蛹金小蜂群体遗传结构分析。
4.如权利要求3所述用于蝇蛹金小蜂多样性分析的微卫星引物的用途的分析方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)基因组DNA提取;
(2)TP-M13-SSR分子标记检测;
(3)进行遗传结构分析。
5.如权利要求4所述用于蝇蛹金小蜂多样性分析的微卫星引物的用途的分析方法,其特征在于,步骤(1)中具体包括如下步骤:
1)从样本中取出个体;
2)容器中研磨成粉末,加入Buffer Digestion,震荡混匀;
3)水浴至细胞完全裂;
4)加入Buffer PA,充分颠倒混匀;
5)离心,将上清液转移到新的容器;
6)加入等体积的异丙醇,充分混匀,室温放置;
7)离心,弃上清;
8)加入乙醇,颠倒漂洗,离心弃上清;
9)开盖室温倒置至残留的乙醇完全挥发;
10)得到的DNA用TE Buffer溶解;
11)收集DNA,保存。
6.如权利要求4或5所述用于蝇蛹金小蜂多样性分析的微卫星引物的用途的分析方法,其特征在于,步骤(1)中采用动物基因组DNA抽提试剂盒进行DNA提取。
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