[发明专利]一种应用于核酸扩增实时电化学pH检测的反应体系和检测方法

权利要求书

1.一种应用于核酸扩增实时电化学pH检测的反应体系，其为恒温扩增反应体系，含有引物、反应液、DNA聚合酶、和待检DNA；所述反应体系中的反应液含有Triton X-100、dNTP、甜菜碱、Mg²⁺、K⁺与NH₄⁺，其特征在于所述反应体系的反应液中有额外添加的OH^-。

2.如权利要求1所述的反应体系，其特征在于所述反应体系的反应液中K⁺的工作浓度在50mM。

3.如权利要求1所述的反应体系，其特征在于所述反应体系的反应液中K⁺主要由KCl或K₂SO₄提供，KCl的工作浓度在22-48mM，K₂SO₄的工作浓度在11-24mM。

4.如权利要求1或3所述的反应体系，其特征在于所述反应体系的反应液中OH^-由KOH提供，所述反应液中KOH的工作浓度在2-8mM。

5.如权利要求1所述的反应体系，其特征在于所述的反应液中NH₄⁺的工作浓度在10-60mM。

6.如权利要求1所述的反应体系，其特征在于所述的反应液中NH₄⁺ 由(NH₄)₂SO₄或NH₄Cl提供。

7.一种基于核酸扩增中pH变化的电化学传感器实时检测恒温扩增的方法，其特征在于它包括以下步骤：

（1）、提取待检样品核酸；

（2）、在反应管中配置权利要求1所述的反应体系；

（3）、扩增反应：将配置好反应体系的反应管混匀后，油封，并插入电极，于60-65℃水浴或金属浴反应50min；

（4）、通过电极连接的数据窗口实时读取pH数据。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于所述油封是指在反应液表面滴加20-50ul油，所用油可以是矿物油或者石蜡油。

9.如权利要求7所述的方法，其特征在于所述电极是对pH敏感的电极。