[发明专利]一种DNA修饰的金纳米比色传感器，及其制备方法以及用途

权利要求书

1.一种DNA修饰的金纳米比色传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将DNA序列(巯基化：S1、FA-DNA:S2)分别溶解在Tris-HCl缓冲溶液中，并保存备用；

(2)将FA结合到3’端修饰氨基的S2上；

(3)一定浓度S2与Tris-HCl缓冲溶液以一定比例混合均匀后于黑暗中培养数小时；

(4)此FA-S2溶液在PBS缓冲溶液中进行透析，分离多余的FA；

(5)将FR加入到上述透析过的溶液中，黑暗中再培养一段时间；

(6)加入ExoI于上述混合溶液中，水解完成后S2/FA-FR形成；

(7)将S1-AuNP与步骤(6)中S2/FA-FR溶液混合均匀，振荡以得到较稳定的溶液。

2.如权利要求1所述的DNA修饰的金纳米比色传感器的制备方法，其特征在于，步骤(1)中Tris-HCl缓冲溶液pH7.4，并在4℃下保存备用。

3.如权利要求1或2所述的DNA修饰的金纳米比色传感器的制备方法，其特征在于，步骤(2)中使用琥珀酰亚胺耦合法EDC-NHS将FA结合到3’端修饰氨基的S2上。

4.如权利要求1-3中任一项所述的DNA修饰的金纳米比色传感器的制备方法，其特征在于，步骤(3)中Tris-HCl缓冲溶液的pH7.4，含10mMFA，1mMEDC，5mMSulfo-NHS，且于37℃黑暗中培养；和/或，步骤(3)中，0.5mL20μMS2与0.5mL100mMTris-HCl缓冲溶液混合均匀后于37℃黑暗中培养3h。

5.如权利要求1-4中任一项所述的DNA修饰的金纳米比色传感器的制备方法，其特征在于，步骤(4)中缓冲溶液pH7.4，多余的FA分子量筛截：1000Da。

6.如权利要求1-5中任一项所述的DNA修饰的金纳米比色传感器的制备方法，其特征在于，步骤(5)中FR为标准系列浓度，37℃黑暗中培养2h，和/或步骤(6)中加入400U/mLExoI，和/或水解30分钟。

7.如权利要求1-6中任一项所述的DNA修饰的金纳米比色传感器的制备方法，其特征在于，步骤(7)中，400μLS1-AuNPs与200μL步骤(6)中S2/FA-FR溶液混合均匀，轻轻振荡5分钟以得到较稳定的溶液，然后将此溶液与黑暗中培养2h后得到系列标准比色溶液；和/或，步骤(7)中S1-AuNPs的制备采用：利用化学还原法，先合成出尺寸均匀的AuNPs分散溶液，再将有巯基修饰的DNA-S1修饰到粒子表面。

8.一种DNA修饰的金纳米比色传感器，其特征在于，其由权利要求1-7所述的方法制备得到。

9.一种权利要求8所述金纳米比色传感器的用途，其特征在于，基于尾端保护比色检测叶酸受体。

10.一种权利要求8所述金纳米比色传感器的用途，其特征在于，适用于FR的可视实时检测，检测范围约为0.5to50μg/mL。