[发明专利]一种桑树中脱氧野尻霉素的提取纯化方法

权利要求书

1. 一种桑树中脱氧野尻霉素的提取纯化方法，其特征在于：它包括以下步骤：

（1）水提：取桑树叶片晒干，然后加去离子水，恒温沸腾提取，过滤收集滤液，滤渣加去离子水再提取，合并滤液，加入三氯乙酸离心，得第一上清液；

（2）上柱：将所述第一上清液用反向柱色谱进行纯化，得到含有脱氧野尻霉素的液体；

（3）醇沉取上清：在上柱后所得的含有脱氧野尻霉素的液体中先加入含醇质量55-65%的乙醇搅拌3-8min，然后再加入含醇质量70-80%乙醇搅拌3-5min，得第二上清液；

（4）浓缩：将所述第二上清液浓缩后得浓缩液；

（5）微波真空干燥：将所述浓缩液微波真空干燥得到含有脱氧野尻霉素的粉末产品。

2. 根据权利要求1所述的一种桑树中脱氧野尻霉素的提取纯化方法，其特征在于：所述步骤（1）水提具体是取桑树叶片在阳光下暴晒晒干，然后加8-12倍晒干后桑树叶片重量的去离子水，置于罐组式逆流提取设备中进行包括至少第一循环、第二循环和第三循环的三次循环提取，所述灌组为每组三个提取罐串联合用，逆流提取流速为25-35min/罐，提取温度为80-110℃；

所述第一循环是从第一提取罐开始逆流提取：具体是将晒干后桑树叶片和8-12倍晒干后桑树叶片重量的去离子水分别按等份加入第一提取罐、第二提取罐和第三提取罐中；第一提取罐第一次提取的药液过滤后放入储液罐备用，第一提取罐的第二次提取和第一提取罐的第三次提取分别加入4-5倍蒸馏水；然后将第一提取罐的第二提取液作为第二提取罐的第一次提取的溶剂，第二提取罐的第一提取液过滤备用；将第一提取罐的第三提取液作为第二提取罐的第二次提取的溶剂，第二提取罐的第二次提取中加入4-5倍蒸馏水；第二提取罐的第二提取液作为第三提取罐的第一次提取的溶剂；

所述第二循环是从第二提取罐开始逆流提取：具体是合并第一循环中的第一提取罐、第二提取罐和第三提取罐中的第一提取液至包含有第一循环第二次提取后的桑树叶渣的第二提取罐中，然后加入4-5倍蒸馏水进行第一次提取；将第二提取罐的第一提取液作为包含有第一循环第一次提取后的桑树叶渣的第三提取罐中，然后加入4-5倍蒸馏水进行第一次提取；然后将第三提取罐的第一提取液作为包含有第一循环第三次提取后的桑树叶渣的第一提取罐中进行第一次提取；

所述第三循环是从第三提取罐开始逆流提取：具体是合并第二循环中的第一提取罐、第二提取罐和第三提取罐中的第一提取液至包含有第二循环第一次提取后的桑树叶渣的第三提取罐中，然后加入4-5倍水进行第一次提取；将第三提取罐的第一提取液作为包含有第二循环第一次提取后的桑树叶渣的第一提取罐中，然后加入4-5倍蒸馏水进行第一次提取；然后将第一提取罐的第一提取液作为包含有第二循环第一次提取后的桑树渣的第二提取罐中进行第一次提取；

合并第三循环中的第一提取罐、第二提取罐和第三提取罐中的第一提取液并过滤收集滤液，加入三氯乙酸离心，得第一上清液。

3. 根据权利要求2所述的一种桑树中脱氧野尻霉素的提取纯化方法，其特征在于：所述三次循环提取中，每8小时断开第一个提取罐卸料，重新投料后进行依次串联。

4. 根据权利要求1所述的一种桑树中脱氧野尻霉素的提取纯化方法，其特征在于：所述步骤（2）具体是将所述第一上清液过C18柱或MCI gel CHP 20P柱色谱，然后用不同浓度的流动相进行梯度洗脱，收集含脱氧野尻霉素的洗脱液。

5. 根据权利要求4所述的一种桑树中脱氧野尻霉素的提取纯化方法，其特征在于：当选用的固定相为C18柱时，流动相A为pH值3.5-4.5的磷酸盐缓冲液，流动相B为乙腈，在柱温28-32℃、pH值5-6的条件下按0.4-0.5ml/min的流速梯度洗脱55-65min；所述梯度洗脱条件为：在0-35min，所述流动相A与流动相B的体积比为（90-95）/（5-10）；在36-45min，所述流动相A与流动相B的体积比为（80-85）/（15-20）；在46-55min，所述流动相A与流动相B的体积比为（68-72）/（28-32）；在56-65min，所述流动相A与流动相B的体积比为（90-95）/（5-10）。