[发明专利]O-烷基氨基甲酸酯壳聚糖、转基因复合物微粒及其制备方法

权利要求书

1.一种O-烷基氨基甲酸酯壳聚糖的制备方法，包括以下步骤：

①壳聚糖氨基的邻苯二甲酰亚胺化：将壳聚糖与邻苯二甲酸酐反应生成邻苯二甲酰亚胺；

②壳聚糖与烷基胺的偶联：将步骤①得到的邻苯二甲酰亚胺分散到无水N-甲基吡咯烷酮中，再加入偶联剂，偶联剂与壳聚糖重复单元的摩尔比为0.1-2:1，所述偶联剂选自羰基二咪唑、光气和碳酸二甲酯中的一种，在常压、氮气气氛下于30-80℃搅拌反应1-5h，再加入C₈-C₂₀的直链烷基胺，与壳聚糖重复单元的摩尔比为0.1-2:1，常压、氮气气氛下于30-80℃搅拌反应1h-5h，得到反应液；

③反应物中氨基的脱保护：在步骤②的反应液中加入无水乙醇，抽滤，收集沉淀，再加入水合肼溶液和甲醇的混合液，回流，脱去邻苯二甲酰基团，收集产物，通过索氏提取进行纯化，再经过真空干燥得到终产品。

2.根据权利要求1所述的O-烷基氨基甲酸酯壳聚糖的制备方法，其特征在于所述壳聚糖的重均分子量为2-10万，脱乙酰度为65％-95％。

3.根据权利要求1所述的O-烷基氨基甲酸酯壳聚糖的制备方法，其特征在于所述直链烷基胺选自月桂胺、C₈直链烷基胺、C₁₀直链烷基胺、C₁₄直链烷基胺、C₁₆直链烷基胺和C₁₈直链烷基胺中的一种。

4.权利要求1～3任意一项权利要求所述的制备方法制备的O-烷基氨基甲酸酯壳聚糖。

5.一种由权利要求4所述的O-烷基氨基甲酸酯壳聚糖制备的脂质体-O-烷基氨基甲酸酯壳聚糖-DNA三元转基因复合物微粒，其特征在于所述三元转基因复合物微粒包括质粒DNA、O-烷基氨基甲酸酯壳聚糖和脂质体，三者的质量比为1:1-10:1-10。

6.权利要求5所述的三元转基因复合物微粒的制备方法，包括以下步骤：将O-烷基氨基甲酸酯壳聚糖溶于pH为3-8的磷酸盐缓冲液中，加入质粒DNA水溶液，室温静置自组装孵育，再加入脂质体水溶液混合，室温静置自组装孵育，质粒DNA、O-烷基氨基甲酸酯壳聚糖和脂质体加入的质量比为1:1-10:1-10。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于所述O-烷基氨基甲酸酯壳聚糖在磷酸盐缓冲液中的质量浓度为0.1-2m_g·mL^-1。

8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于所述质粒DNA水溶液的质量浓度为0.1-1mg·mL^-1。

9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于所述脂质体水溶液的质量浓度为0.3-3mg·mL^-1。