[发明专利]鸭源多种致病菌的多重PCR检测引物组及其试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及鸭源多种致病菌的多重PCR检测引物组及其试剂盒。

背景技术

鸭疫里氏杆菌(RiemerellaAnatipestifer，RA)是雏鸭、雏火鸡以及雏鹅等多种禽类感染发病的致病菌，对1～8周龄的鸭危害最大，临床上呈急性或慢性败血症，病变以纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎、脑膜炎为主，部分病例出现干酪性输卵管炎、结膜炎、关节炎等特征，俗称鸭传染性浆膜炎。

鸭大肠杆菌病是致病性大肠杆菌（Escherichia coli，E.coli）感染所引起，由于感染鸭的年龄、抵抗力以及大肠杆菌的致病力、感染途径的不同，可以产生许多不同的病理变化和临床症状。在雏鸭以引起大肠杆菌肝炎和脑炎为特征，在产蛋鸭以发生大肠杆菌性生殖器官病为特性。大肠杆菌是一种条件性致病菌，当各种应激刺激造成鸭的免疫功能降低时，就会发生感染。因此，在临床上常常成为鸭疫里氏杆菌病的并发症。

鸭链球菌病是由链球菌（Streptococcus，Strep）引起的鸭的急性或慢性传染病，雏鸭感染主要表现为急性死亡，一旦发病，可引起大量死亡。成年鸭和种鸭感染主要表现为跛行与瘫痪，死亡率较低，对生产性能的影响较大，造成较大的经济损失。

鸭沙门氏菌病是由鼠伤寒沙门氏菌、鸭沙门氏菌和肠炎沙门氏菌等引起的疾病的总称。各种日龄的鸭都能感染，主要发生在雏鸭，可造成大批死亡。这一类细菌可引起人的食物中毒，在公共卫生上有重要意义。

鸭疫里氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌（Salmonella，Salm）是造成鸭纤维性心包炎、浆膜炎及肝周炎的主要致病菌，给世界各国养禽业带来严重危害。同时，鸭疫里氏杆菌与链球菌混合感染也较为常见。主要表现为浆膜炎，容易导致误诊，若仅按浆膜炎治疗，虽症状会减轻，死亡率有所下降，但停药后又复发。

以上4种细菌性传染病都易发生于雏鸭，且容易混合感染，均可引起浆膜炎，其临床症状和剖检病变相似，难以区分。目前对这些致病菌的检验仍主要沿用传统的细菌培养、生化鉴定的方法以及针对单个病原建立的PCR检测方法等。细菌的分离与鉴定是诊断的金标准，但这种方法检测周期长、操作繁琐，灵敏度低且不能大批量检测。

覃宗华等研究的“鸭疫里默氏菌病和大肠杆菌病鉴别诊断双重PCR方法的建立和应用”公开了一种能快速准确鉴别诊断鸭疫里默氏菌和大肠杆菌病的双重PCR方法，但该方法也仅能同时检测2种鸭子的细菌病，为了节约成本，提高检测效率，寻求一种同时检测多种细菌病的方法是必要的。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术中鸭源致病菌检测技术的不足，提供一组用于鸭源多种致病菌的检测引物组，所述致病菌包括鸭疫里氏杆菌、大肠杆菌、链球菌及沙门氏菌。

本发明的另一个目的是提供含有上述检测引物组的试剂盒。

本发明的另一个目的是提供上述检测试剂盒在检测鸭疫多种致病菌中的应用。

本发明的目的是通过以下技术方案予以实现的：

本发明提供了一种用于检测4种鸭源致病菌的多重PCR检测引物组，所述引物组包含4对引物：RA rpoB-P1和RA rpoB-P2；E.coli phoA-P1和E.coli phoA-P2；Salm invA-P1和Salm invA-P2；Strep 16srRNA-P1和Strep 16srRNA-P2；引物序列如SEQ ID NO：1～8所示；所述4种鸭源致病菌为鸭疫里氏杆菌、大肠杆菌和沙门氏菌和链球菌。

其中所述RA rpoB-P1的核酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述RA rpoB-P2的核酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述E.coli phoA-P1的核酸序列如SEQ ID NO：3所示，所述E.coli phoA-P2的核酸序列如SEQ ID NO：4所示，所述Strep16srRNA-P1的核酸序列如SEQ ID NO：5所示，所述Strep 16SrRNA-P2的核酸序列如SEQ ID NO：6所示，所述Salm invA-P1的核酸序列如SEQ ID NO：7所示，所述Salm invA-P2的核酸序列如SEQ ID NO：8所示。