[发明专利]一种木二糖的气相色谱检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及木二糖，尤其是涉及一种木二糖的气相色谱检测方法。

背景技术

低聚木糖是一种非消化性低聚糖，是由2～7个D-木糖以β-1,4-木糖苷键结合而成的低聚糖，是新一代功能性低聚糖产品。低聚木糖具有优良的稳定性，能在较宽的pH值、温度范围内保持稳定，能选择性增殖肠道内的双歧杆菌，具有促进双歧杆菌增长以及改善肠道功能的作用。它的甜度比蔗糖和葡萄糖均低，仅为蔗糖的40%，具有抗龋齿性。其独特的生理活性和良好的理化特性使得低聚木糖被认为是目前最有前途、国内外研究最为广泛的功能性低聚糖之一。木二糖是低聚木糖的主要有效成分，也是低聚木糖定性和定量的关键成分。因而如何快速而准确地检测木二糖含量就成了这类研究得以进行的关键问题之一。

常见的木二糖分析方法有纸层析法、薄层层析法、高效液相色谱法。前2种方法属定性方法，定量效果不理想，低于mg量级就难以检测。高效液相色谱法是最常见的木二糖定量分析方法，但当样品中糖类组分较多时，其分离效果往往很差，检测灵敏度差，重现性不好，而且分析时间长，消耗流动相多，天然糖组分往往杂质多，对色谱柱寿命影响很大。采用衍生化法配合气相色谱是分析单糖的常见方法，具有速度快、灵敏度高等优点，但用于分析木二糖尚未见报道。采用气相色谱分析木二糖需要解决两个问题：一是要有合适的衍生化方法，二是合适的操作控制条件，使之具有较高的理论塔板数和良好的柱效。

中国专利CN102288688A公开一种利用高效液相离子交换色谱测定低聚木糖的方法。该方法包括：高效液相离子交换色谱系统与色谱条件的确定、低聚木糖标准工作方程的测定、木七糖和木八糖的色谱保留时间确定和低聚木糖成分的分析与测定。该发明利用高效液相离子交换色谱测定低聚木糖的方法，建立了高效液相离子交换色谱精确定量测定低聚木糖的方法，采用CarboPacTMPA200（3×250m）色谱柱，通过醋酸钠和氢氧化钠二元梯度洗脱显著提高了木糖及各种低聚木糖组分之间的分离度及检测效率，实现对低聚木糖样品，尤其是木二糖至木六糖组分的精确定量测定，及对木七糖和木八糖类糖组分的定性分析，对于低聚木糖产品的检测评价和推广应用具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种木二糖的气相色谱检测方法。

本发明包括如下步骤：

1）样品衍生化：

取含木二糖的低聚木糖样品、核糖醇内标，加入NaBH₄和去离子水，反应后，加入乙酸至无气泡产生，再加入甲醇，减压浓缩至干燥，然后加入乙酸酐和吡啶，继续反应后加入乙酸乙酯萃取衍生化产物，水洗，得标准样品，用于气相色谱分析；

2）设定仪器工作条件：

气相色谱柱的温度为150～400℃，流动相的流速为0.1～10.0mL·min^-1，检测器的温度为150～400℃；

3）进样：

将待测液进样至进样口内，开始检测并记录色谱图，并用气质联用仪分析其成分；

4）结果表征：

借助分析软件，得到木二糖的校准曲线，用作样品中木二糖的定量分析，根据木二糖峰的出峰面积与内标峰的面积的比值判断木二糖的含量。

在步骤1）中，所述含木二糖的低聚木糖样品、核糖醇内标、NaBH₄、去离子水、甲醇、乙酸酐、吡啶、乙酸乙酯的配比可为0.1～100mg∶0.1～100mg∶1～500mg∶0.1～10mL∶0.1～20.0mL∶0.1～5.0mL∶0.1～5.0mL∶1mL，其中，含木二糖的低聚木糖样品、核糖醇内标、NaBH₄以质量计算，去离子水、甲醇、乙酸酐、吡啶、乙酸乙酯以体积计算；所述反应的时间可为0.5～5h；所述减压浓缩的温度可为40～90℃；所述继续反应的温度可为70～120℃，继续反应的时间可为0.1～3.0h。

在步骤2）中，所述气相色谱柱可采用非极性气相色谱柱、弱极性气相色谱柱、中极性气相色谱柱等中的一种；所述流动相可采用氮气或氦气等；所述检测器可采用TCD检测器或FID检测器等。

在步骤3）中，所述将待测液进样至进样口内的进样量可为0.1～200μL。