[发明专利]基于P-硝基苯丙氨酸插入法构建的骨质疏松疫苗在审
| 申请号： | 201410155986.X | 申请日： | 2014-04-18 |
| 公开（公告）号： | CN103961694A | 公开（公告）日： | 2014-08-06 |
| 发明（设计）人： | 陶惠人;李锋 | 申请（专利权）人： | 陶惠人;李锋 |
| 主分类号： | A61K39/00 | 分类号： | A61K39/00;C12N15/12;C12N15/63;C07K14/47;A61P19/10 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 710000 陕西省西安*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 硝基 苯丙氨酸 插入 构建 骨质 疏松 疫苗 | ||
【权利要求书】：
1.一种基于P-硝基苯丙氨酸插入法构建的骨质疏松疫苗，其特征在于通过如下步骤制备：1)RANKL重组表达载体的构建；2)非天然氨基酸p-硝基化苯丙氨酸编码序列的定点插入/置换；3)p-硝基化苯丙氨酸-RANKL蛋白的重组表达与纯化；4)动物免疫与筛选；5)基于血清中和检测及破骨细胞形成分析后的筛选；6)动物实验，确定所需疫苗。
2.如权利要求1所述的基于P-硝基苯丙氨酸插入法构建的骨质疏松疫苗，其特征在于：从骨髓基质细胞中提取RNA，通过RT-PCR扩增RANKL基因编码区，将胞外段克隆入表达载体，构建重组表达载体。
3.如权利要求1所述的基于P-硝基苯丙氨酸插入法构建的骨质疏松疫苗，其特征在于：所述定点插入/置换是通过基于PCR的体外突变技术定点将RANKL基因编码酪氨酸或苯丙氨酸的密码子置换成能被非天然氨基酸p-硝基化苯丙氨酸反密码子特异识别的琥珀突变密码子TAG。
4.如权利要求1所述的基于P-硝基苯丙氨酸插入法构建的骨质疏松疫苗，其特征在于：在共转化表达琥珀突变抑制子tRNA(mutRNACUA)和p-硝基苯丙氨酸-tRNA合成酶的大肠杆菌内表达插入p-硝基化苯丙氨酸RANKL突变体，纯化重组蛋白。
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