[发明专利]具有解酒功能厌氧菌的筛选方法

说明书

技术领域

本发明涉及菌的筛选方法，尤其涉及一种功能性厌氧菌的筛选方法。

背景技术

酒自古以来同我国历史文化密不可分，在世界各地酒同样是倍受欢迎的饮品。适量饮酒能为身体健康带来益处，但是过量饮酒导致的醉酒不仅会对身体造成负面影响，而且酒醉往往会使人失去理智以致严重后果。因此，研制开发高效的解酒制品成为国内外共同关注的课题。

目前市场上的解酒制品多侧重化学合成药物和天然中草药，未有以活体益生菌为载体的解酒制品，解酒效果也相对比较不够理想，未能根本上减少人体对乙醇的吸收和减轻乙醇的毒害作用。

益生菌被联合国粮农组织和世界卫生组织定义为“当摄入足够的量能为宿主提供健康益处的活的微生物”。乳酸菌和双歧杆菌是最常见的益生菌类型并且不断有证据表明一些益生乳酸杆菌能提供对健康有益的作用，如抑制有害的肠道细菌和代谢产物，调节免疫功能，抑制肠道疾病，抗过敏，抑制炎症和抗癌等功效。被用于作为各种发酵乳制品和膳食补充剂的发酵剂的双歧杆菌已经被证实了有益生和对胃的保护作用^[1]。以富含益生菌的食品作为筛选对象，得到具有解酒效果的功能性益生菌株，不仅可以为开发高效的益生菌解酒产品提供基础，而且具有重要的理论价值和应用前景。

但是考虑到体内的厌氧环境，筛选条件必须为严格的厌氧条件。

综合考虑体内的厌氧环境和安全性问题，克服传统筛选方法筛选到的解酒菌株难以适应体内的厌氧环境，并且由于安全性无法直接用于人体，即使获得了菌株，其在体内对酒精的降解效能低且不稳定的缺陷，使得筛选得到的具有解酒功能厌氧菌可用于帮助人体减轻酒精的毒害作用和尽快醒酒，并能用于开发新型微生物解酒制剂。

参考文献：

[1] Gomi A, Harima-Mizusawa N, Shibahara-Sone H, et al. Effect of Bifidobacterium bifidum BF-1 on gastric protection and mucin production in an acute gastric injury rat model[J]. Journal of Dairy Science, 2013, 96(2): 832-837。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术筛选解酒菌存在的难以适应体内的厌氧环境并且由于安全性无法直接用于人体，对酒精的降解效能低且不稳定的问题，提供一种具有解酒功能厌氧菌的筛选方法。

具有解酒功能厌氧菌的筛选方法包括如下步骤：

1)分别配制液体富集培养基和固体筛选培养基；

2)取发酵乳、泡菜发酵食品样品5~8 g；

3)将步骤2)的食品样品于步骤1)的液体富集培养基中厌氧培养5~10 h，使乙醇耐受菌充分富集，得到富集培养液；

4)将固体培养基加热融化，然后冷却至45℃，迅速将1 mL富集培养液与之混合，摇匀后放入厌氧培养箱中、37℃条件下培养，直至长出菌落，得到具有解酒功能厌氧菌株；

5)对具有解酒功能厌氧菌株分离纯化，并得到具有解酒功能厌氧菌株的纯培养物；

6)将具有解酒功能厌氧菌株的纯培养物接于MRS液体培养基于厌氧培养箱中、36~38℃条件下培养36~48 h，得到菌液；

7)各取200 μL菌液，以空白培养液作为参照，分光光度计下600 nm处测定样品菌液相对浓度OD₆₀₀，根据读数用无菌水稀释菌液至相同菌液浓度10⁶~10⁸ cfu/mL；

8)将稀释的菌液5 mL分别与等体积5 %~80 %（v/v）乙醇迅速混合均匀，厌氧环境37℃静置0.5~1 h，进行解酒反应；

9)测定解酒反应前后乙醇浓度的变化值，比较即可得到各初筛菌株的解酒能力的定量大小，选取性能突出的菌株即可。