[发明专利]具有解酒功能厌氧菌的筛选方法

权利要求书

1.一种具有解酒功能厌氧菌的筛选方法，其特征在于它包括如下步骤：

1)分别配制液体富集培养基和固体筛选培养基；

2)取发酵乳、泡菜发酵食品样品5~8 g；

3)将步骤2)的食品样品于步骤1)的液体富集培养基中厌氧培养5~10 h，使乙醇耐受菌充分富集，得到富集培养液；

4)将固体培养基加热融化，然后冷却至45℃，迅速将1 mL富集培养液与之混合，摇匀后放入厌氧培养箱中、37℃条件下培养，直至长出菌落，得到具有解酒功能厌氧菌株；

5)对具有解酒功能厌氧菌株分离纯化，并得到具有解酒功能厌氧菌株的纯培养物；

6)将具有解酒功能厌氧菌株的纯培养物接于MRS液体培养基于厌氧培养箱中、36~38℃条件下培养36~48 h，得到菌液；

7)各取200 μL菌液，以空白培养液作为参照，分光光度计下600 nm处测定样品菌液相对浓度OD₆₀₀，根据读数用无菌水稀释菌液至相同菌液浓度10⁶~10⁸ cfu/mL；

8)将稀释的菌液5 mL分别与等体积5 %~80 %（v/v）乙醇迅速混合均匀，厌氧环境37℃静置0.5~1 h，进行解酒反应；

9)测定解酒反应前后乙醇浓度的变化值，比较即可得到各初筛菌株的解酒能力的定量大小，选取性能突出的菌株即可。

2.根据权利要求1所述的一种具有解酒功能厌氧菌的筛选方法，其特征在于所述的液体富集培养基由MRS培养基添加8 %（v/v）无水乙醇，pH 6.8。

3.根据权利要求1所述的一种具有解酒功能厌氧菌的筛选方法，其特征在于所述的每升固体筛选培养基是由 0.5~2 g KH₂PO₄、0.3~0.6 g MgSO₄·7H₂O、0.1~0.5 g NaCl、4~6 g (NH₄)₂SO₄、0.01~0.02 g FeSO₄·7H₂O、20~25 g 琼脂、8 %（v/v）无水乙醇和余量的蒸馏水组成。