[发明专利]检测体细胞核移植胚胎发育能力的引物、试剂盒及方法

权利要求书

1.检测体细胞核移植胚胎发育能力的引物对，其特征在于：如SEQ ID NO.6～SEQ ID NO.9所示。

2.根据权利要求1所述的检测体细胞核移植胚胎发育能力的引物对，其特征在于：所述引物对扩增的核苷酸序列为Thy1基因的一段，如SEQ ID NO.16所示。

3.权利要求1所述的检测体细胞核移植胚胎发育能力的引物对在制备检测体细胞核移植胚胎发育能力的试剂盒中的应用。

4.一种检测体细胞核移植胚胎发育能力的试剂盒，其特征在于：包括用于扩增SEQ ID NO.16所示序列的如SEQ ID NO.6～SEQ ID NO.9所示的引物，以及PCR扩增反应所需要的常规试剂。

5.根据权利要求4所述的检测体细胞核移植胚胎发育能力的试剂盒，其特征在于：试剂盒组成为：20μL扩增体系：10×PCR Buffer（Mg²⁺Plus）2μL，dNTP Mixture（各2.5mM）1.6μL，SEQ ID NO.6～SEQ ID NO.9所示的上游和下游引物各0.4μL（10μmol/L），模板5μL,Taq HS（5U/μL）0.1μL，ddH₂O12.5μL。

6.权利要求4或5所述的检测体细胞核移植胚胎发育能力的试剂盒在检测体细胞核移植胚胎发育能力中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：应用时，检测方法步骤如下：

1）Proteinase K消化待测样品；

2）待测样品的亚硫酸氢盐处理；

3）以步骤2）处理后的基因组DNA为模板，利用SEQ ID NO.6～SEQ ID NO.9所示的引物对，进行热启动PCR扩增，得到PCR扩增产物；

4）对步骤3）获得的PCR产物进行测序，检测CpG位点的甲基化程度。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：检测CpG位点的甲基化程度后，根据CpG位点的甲基化程度评价体细胞核移植胚胎发育能力：甲基化程度为32%以下时，体细胞核移植胚胎发育到囊胚的能力为32%以下；甲基化程度为32%～55%时，体细胞核移植胚胎发育到囊胚的能力为32%～55%；甲基化程度为55%以上时，体细胞核移植胚胎发育到囊胚的能力为55%以上。

9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：检测CpG位点的甲基化程度后，根据CpG位点的甲基化程度评价体细胞核移植胚胎发育能力：检测检测核移植后36小时胚胎时，若甲基化程度为24.03～30.03%，则该胚胎发育到囊胚的概率为19.91%。