[发明专利]室内培养获得小麦矮腥黑粉菌发病植株的方法

权利要求书

1.小麦矮腥黑粉菌发病植株的室内培养方法，包括完全在室内完成的如下步骤：

（1）制备小麦矮腥黑粉菌萌发冬孢子：

从小麦病穗中取菌瘿，进行表面消毒后制备成用于接种的小麦矮腥黑粉菌冬孢子悬浮液；

将配制好的冬孢子悬浮液加入盛于培养皿中的培养基平板上，均匀涂抹，盖上培养皿盖并封口膜封好后倒置放于5℃的光照培养箱中培养，光照强度为600lx，培养15d之后开始镜检观察，以菌丝长到冬孢子直径的1/2时视为萌发，约70%的冬孢子萌发后用于小麦的人工接种；

（2）制备用于接种矮腥黑粉菌的小麦种子：

小麦种子表面消毒杀死种子表面可能携带的小麦矮腥黑粉菌和小麦网腥黑粉菌孢子，然后浸种催芽，胚芽鞘长度为1～3mm时用于接种萌发的冬孢子；

（3）小麦的人工接种：

在所述培养皿盖中铺上水润湿的滤纸，将步骤（2）制备的小麦种子铺放在所述滤纸上；

将步骤（1）制备得到的承载有小麦矮腥黑粉菌萌发冬孢子的培养皿倒扣到铺放有小麦种子的所述培养皿盖中，使承载着小麦矮腥黑粉菌萌发冬孢子的一面与所述小麦种子接触，置于5℃的温度条件下进行春华处理直到苗长到3～5cm；将幼苗移入土壤中种植至植株成熟；（4）室内培养发病植株：

将接种了小麦矮腥黑粉菌的幼苗种植到装有灭菌土壤塑料盆中，置于白天30℃，夜晚18℃的人工气候培养箱中，进行常规管理，定期观察小麦生长状况，将植株种植至成熟。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中所述表面消毒的方法如下：从病穗中取1粒菌瘿，置于2mL离心管中，加入适量蒸馏水浸泡菌瘿，静置30min，然后将菌瘿捣碎并充分振荡，用150目网筛过滤后，将滤液放在室温下培养24h，低速离心后弃去上清液，加0.25%NaClO水溶液并在室温下放置1min，用灭菌水洗3次。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（2）中所述小麦种子表面消毒采用30%NaOCl水溶液浸泡5min，无菌水冲洗3次。

4.根据权利要求1所述的室内培养方法，其特征在于，步骤（4）中所述灭菌土壤指将营养土放入高压灭菌锅内，加热到60～100℃，持续30～60min。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述用于接种的小麦矮腥黑粉菌萌发冬孢子悬浮液的浓度为(50～130)×10⁴个/mL。

6.根据权利要求1～6任一所述的方法，所述培养基指土壤浸提液培养基，配方为：1000mL培养基中含有20g琼脂、5mg80万IU青霉素、75g土壤。