[发明专利]一种内生枯草芽孢杆菌正突变株、制备方法和制备的生防菌剂及其防治石榴干腐病的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物农药技术领域，具体涉及一种具有高抗石榴干腐病菌活性的内生枯草芽孢杆菌正突变株NS04307及其制备以及防治石榴干腐病的应用。

背景技术

石榴干腐病是影响石榴产业的重要病害，其病原菌为石榴垫壳孢（Coniella granati (Sacc.)Petr.&Syd）异名：Zythia versoniana Sacc.，属于半知菌亚门（Deuteromycotina）、球壳孢目（Sphaeropsidales）。主要侵染果实和树干，也可以侵染石榴花器、果枝和新梢。病原菌的菌丝或分生孢子能够在病果、病枝、病果台上越冬，致使病果皮、病枝等成为初侵染源。当夏季雨水多时，石榴干腐病发病情况尤其严重，轻者石榴产量受影响，重者石榴树整枝或整株枯死。据统计，一般年份病果率达10%~40%，严重时病果率达到60%~80%，减产一般2~3成，高者达5成以上。此外，若贮藏期间湿度不适宜，造成大量烂果。可见，石榴干腐病严重影响了石榴的经济价值和观赏价值。

目前，国内外对石榴干腐病一般采取以农业防治技术为基础，化学防治技术为主导的综合防治措施。农业防治多采用清园、套袋、加强栽培管理等。化学防治主要喷施化学农药，常使用的农药有甲基托布津（Thiophanate-Methyl），加瑞农可湿性粉剂（Kasumin+Bordeaux）、代森锰锌（Mancozeb）、多菌灵（Carbendazim）、福美砷（Carbendazim）、石硫合剂（Lime sulfur）等。

    化学防治在短期内的确有效，但是化学农药造成的环境污染问题、病原菌抗药性问题和对人类健康的潜在威胁十分严重。我国耕地面积居世界第4位，但每年农药用量高达80～100万t，居世界之首。化学农药对环境的影响和破坏，尤其是对地下水和食品的污染问题已到了令人触目惊心的地步；由于化学农药的不合理使用，导致病原微生物产生抗药性，致使人们更频繁的喷施更多、更毒的农药，产生恶性循环，极大的破坏了生态平衡和生物的多样性。消费者对无公害农产品、绿色食品和有机食品的强烈需求，开发高效、低毒、无残留的生物农药已成为迫切希望。生物农药是指利用生物产生的生物活性物质或生物活体作为农药，以及人工合成的与天然化合物结构相同的农药，是不污染环境的绿色农药，可望成为解决化学农药残留污染的有效途径之一。

但是在微生物防治植物病害的相关研究中，活体微生物农药的有效性受到了田间环境的限制，很难在靶标部位定殖，影响杀菌效果。植物内生菌（Plant endophyte）作为生防菌株发展迅速并已成为当前微生物学研究领域的热点，其独具优势的特性使其成为植物病害生物防治的一类极具应用潜能的新型资源菌。现有研究发现植物内生细菌具有稳定的生存空间，它们与宿主植物之间的关系比宿主与土壤微生物及其附生菌更加密切。一些微生物能够分泌拮抗物质作用于病原菌的细胞膜、细胞壁、能量代谢系统及蛋白质合成系统，从而抑制或杀死病原菌。此外，内生细菌在植物体内占据了一定的生态位点从而阻止了病原菌的入侵和定殖；内生细菌还可以与病原菌竞争养分，使病原菌得不到营养供给而死亡。目前，关于大豆、水稻、小麦、棉花、香蕉、苹果、番茄、辣椒等作物的内生细菌研究的较多。但从植物组织内部筛选的内生菌一般抑菌效果较低，诱变育种是工业微生物育种的重要方向，而其中又以物理诱变方法中的紫外线辐射诱变使用最为普遍，其他物理诱变因子则受设备条件的限制，难以普及，因此，可以使用紫外诱变的方法选育高抗活性的正突变株，使内生生防菌在防治植物病害上有更大的应用潜力。目前有关石榴干腐病内生菌细菌的研究在国内外还属于空白。

综上所述，筛选有效的内生细菌，开发新型、安全有效的微生物杀菌剂，控制石榴干腐病的发生，是提高石榴产量，减少贮藏期石榴的损失，促进石榴产业经济可持续发展的迫切需要。

发明内容

本发明需要解决的问题是利用植物内生细菌资源开发一种可用于防治石榴干腐病及其它植物病害的广谱、高效、可产业化生产的内生枯草芽孢杆菌正突变株生防菌剂，提供由内生菌Bacillus subtilis NS04菌株为出发菌株选育的正突变菌株NS04307的方法，提供由正突变菌株NS04307制备的生防菌剂及其防治石榴干腐病的应用方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：