[发明专利]以多糖作为信号放大媒介体的核酸电化学生物分析方法

权利要求书

1.一种以多糖作为信号放大媒介体的高灵敏核酸电化学生物分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、将金电极表面打磨至镜面，清洗干净后，在水虎鱼酸中浸泡，清洗后，在稀硫酸中对电极表面进行电化学预处理，清洗干净后用氮气吹干；

步骤二、将修饰有巯基末端的肽核酸的水溶液滴加到上述预处理过的金电极表面，进行反应，将残余的肽核酸清洗干净，用巯基己醇对电极表面进行封闭，封闭结束后冲洗干净，用氮气吹干；

步骤三、将含待测寡核苷酸片段的溶液滴加到步骤二所得的电极表面，杂交反应结束后，将未参与杂交反应的寡核苷酸片段清洗干净，用氮气吹干；

步骤四、将步骤三所得电极表面浸泡在含过渡金属离子的溶液中，反应完成后清洗干净，将多糖滴加到电极表面，反应结束后清洗干净，用氮气吹干；

步骤五、将步骤四所得电极表面浸泡在强氧化性试剂中，反应结束后清洗干净，将银离子溶液滴加到电极表面,反应结束后清洗干净，用氮气吹干；

步骤六、将步骤五所得电极表面沉积的银纳米粒子用电化学方法进行检测。

2.如权利要求1所述的以多糖作为信号放大媒介体的高灵敏核酸电化学生物分析方法，其特征在于，步骤一中所述的电极表面依次用0.3微米和0.05微米的氧化铝悬浮液打磨，所述水虎鱼酸中浓硫酸与过氧化氢的体积比为3:1，所述的浸泡时间为10min，所述的稀硫酸的浓度为0.5M，所述电化学预处理采用循环伏安法，其扫描电位范围为-0.2～1.5V。

3.如权利要求1所述的以多糖作为信号放大媒介体的高灵敏核酸电化学生物分析方法，其特征在于，步骤二中所述的肽核酸的水溶液的浓度为1.0uM，反应时间为90min，所述巯基己醇浓度为2.0mM，封闭时间为45min。

4.如权利要求1所述的以多糖作为信号放大媒介体的高灵敏核酸电化学生物分析方法，其特征在于，步骤三中所述的待测寡核苷酸片段的溶液中溶剂为pH=8.0的TE缓冲液，杂交反应时间为45～120min，其中，TE缓冲液为：10mMTris-HCl+1mM EDTA。

5.如权利要求1所述的以多糖作为信号放大媒介体的高灵敏核酸电化学生物分析方法，其特征在于，步骤四中所述过渡金属离子为锆离子，其浓度为5mM，浸泡时间为45min，所述的多糖为饱和多聚半乳糖醛酸钾，反应时间为60min。

6.如权利要求1所述的以多糖作为信号放大媒介体的高灵敏核酸电化学生物分析方法，其特征在于，步骤五中所述强氧化性试剂为高碘酸钠，其浓度为25mM，浸泡时间为120min，所述银离子溶液为银氨溶液，其浓度为7～17mM，反应时间为60min。

7.如权利要求1所述的以多糖作为信号放大媒介体的高灵敏核酸电化学生物分析方法，其特征在于，步骤六中所述电化学方法为差分脉冲伏安法，其扫描电位范围为-0.15～0.25V。