[发明专利]一种发酵唾液乳酸杆菌提取胆盐水解酶的方法

权利要求书

1.一种利用唾液乳酸杆菌(Lactobaicillus salivarius) LMG14476发酵提取胆盐水解酶的方法，其特征在于采用超声波处理与硫酸铵沉淀结合的方法提取唾液乳酸杆菌中的胆盐水解酶。

2.如权利要求1所述的利用超声波辅助法处理乳酸菌发酵后菌体细胞提取细胞内溶物，其特征在于包括如下步骤：

(1) 所述乳酸菌的发酵液以8 000 r/min，4 °C离心8 min，收集沉淀菌泥；

(2) 用生理盐水离心洗涤步骤(1)中的菌体沉淀2次，条件同上；

(3) 向步骤(2)的沉淀中加入0.02 mol/L的pH 6.0的磷酸盐缓冲液至发酵液原体积，细胞悬浮液于冰浴中进行超声波破碎15 min，功率400~450 w，工作1 s，间歇2 s；

(4) 以10 000 r/min，4 °C离心8 min，除去步骤(3)所得悬浮液中的细胞碎片，收集含胆盐水解酶的上清液。

3.如权利要求2所述的含胆盐水解酶的上清液经硫酸铵处理的方法，其特征在于：权利2所得含胆盐水解酶的上清液用70%~75%饱和浓度的硫酸铵于4 °C 盐析24 h，以10 000 r/min， 4 °C离心15~20 min，收集沉淀的蛋白物质。

4.如权利要求3所述的蛋白沉淀经溶解透析的方法，其特征在于：以0.02 mol/L的pH 6.0的磷酸盐缓冲液溶解权利3所得蛋白物质，用预处理的透析袋于4 °C透析至透析液经BaC12检验无沉淀为止，透析液即为胆盐水解酶提取液。

5.如权利要求4所述的透析液经冷冻干燥制备酶制品的方法，其特征在于：将50 ml或100ml的权利要求4所得胆盐水解酶透析液注入500 ml无菌冻干瓶内， 在-25 °C条件下16~24 h预冻至冻结状态，在博医康FD-1A-50冷冻真空干燥机上于0.22~0.24 mBar真空度、冷阱温度为-55 °C条件下升华干燥36~72 h，其干燥物即为乳酸菌胆盐水解酶粗制品。