[发明专利]一种与小型猪2型糖尿病有关的SNP标记、其检测方法和用途

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，涉及一种与小型猪2型糖尿病有关的SNP标记、其检测方法和用途。

背景技术

糖尿病(diabetes mellitus,DM)是一种慢性内分泌代谢性疾病，严重的威害人类的健康，其主要标志是高血糖。近年来，全球糖尿病患病率呈迅速上升的趋势，2011年世界卫生组织统计数据表明，全球的糖尿病患者已经达到3.66亿人,预计至2030年全球发病率将达4.39亿人。我国18岁及以上居民糖尿病患病率为9.7%，60岁以上老年人患病率高达19.6%，全国约有成年糖尿病患者9700万人，糖尿病已经成为影响我国人口健康尤其是老年人身体健康的主要疾病，极大增加了社会养老的成本，这个问题在今后我国老年人口比率增加的趋势下显得日益尖锐。根据发病机制的不同，糖尿病可分为1型、2型、特异型和妊娠糖尿病4类。其中，2型糖尿病（Type 2 Diabetes mellitus,T2DM）患者占糖尿病人总数的90%以上，不断探索2型糖尿病治疗新方法及开发新药物具有非常重要的临床意义和社会价值。

普遍认为2型糖尿病是由遗传、行为、环境等多种危险因素共同参与和相互作用所引起的多因子疾病，2型糖尿病的发病机制仍然不够清楚，治疗效果不理想。在2型糖尿病发病机制、药物开发和干预治疗的研究中，2型糖尿病动物模型的构建和使用有着非常重要的意义。动物模型在糖尿病研究中已经得到广泛的应用，早期胰腺在糖代谢平衡中的中心作用在胰腺切除犬实验得到了证实，并发现和纯化了胰岛素。链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)和四氧嘧啶(alloxan)是对胰岛具有选择性的毒素，能引发多种动物的高血糖症，最常用于1型糖尿病模型的建立。通过遗传选育，可培育出1型糖尿病、2型糖尿病的相关表型的品系，如胰岛素抵抗和肥胖的理想动物模型。近年来，大量的糖尿病相关基因研究的动物模型已通过分子生物学等技术建立，其中包括广义基因剔除、基因替换和组织特异性基因剔除小鼠。小型猪在解剖学、生理学、营养代谢和疾病特征等方面都与人有较大的相似性。小型猪具有生命周期长、性成熟早、繁殖快、易于饲养等特点，在生物医学研究领域中具有重要的应用价值。相比于大小鼠，小型猪与人类更加接近，型猪的脏器系数更近于人类；另一方面猪的胰岛素与人类的胰岛素只差一个氨基酸，对糖的吸收、转运和利用等方面与人类更为相似；相比于非人灵长类动物，小型猪没有苛刻的伦理道德和动物保护方面的要求，加上饲养和试验成本较低，小型猪成为制作2型糖尿病模型的理想动物。但建立大动物2型糖尿病模型的方法具有很大的难度，获得自发性糖尿病小型猪的几率非常稀少，因此，目前急需筛选培育出小型猪2型糖尿病易感或抵抗品系。

2型糖尿病是同时由遗传因素和环境因素互相作用而引发的代谢异常性疾病，大量的研究表明，许多基因的单核苷酸多态性多态性（single nucleotidepolymorphism，SNP）与2型糖尿病的发生存在着不可忽视的关系。Leptin基因属于分泌型蛋白类激素，主要是脂肪组织合成，以单体形式存在于血液中，最早被用克隆定位的方法从小鼠中成功克隆出来。Leptin的主要功能是增加能量的消耗，降低食物的摄入以及减轻体重，所以又被成为瘦素。最近的研究发现，Leptin不仅和集体的能量代谢有关，还参与生殖系统的发育、机体的生长、还与人类的肥胖和糖尿病有关联。和其他一些蛋白一样，Leptin的生理功能也需要通过与相应受体的结合来体现。人Leptin受体基因位于1号染色体，长度大于70kbp，包含有20个外显子，是Leptin高亲和力因子，又称作糖尿病基因。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种与小型猪2型糖尿病易感性相关的SNP标记。

本发明的另一个目的在于提供用于检测上述SNP标记的引物和检测方法。

本发明的另一个目的在于提供上述SNP标记的用途。

本发明所述的与小型猪2型糖尿病易感性相关的SNP标记，是在小型猪Leptin基因的1号外显子325bp处的（G/A）多态，具有该SNP标记的Leptin基因的1号外显子核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

检测上述SNP标记所用的引物的核苷酸序列如SEQIDNO:2和SEQ ID NO:3所示。

在小型猪中检测所述与小型猪2型糖尿病易感性相关的SNP标记的方法，包括以下步骤：

（1）提取小型猪的基因组DNA；

（2）用提取的小型猪基因组DNA为模板，使用核苷酸序列如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的引物来进行PCR扩增；