[发明专利]帕金森病和脑白质疏松症的突变检测试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明属于分子诊断领域，涉及用于检测与帕金森病和脑白质疏松症相关突变：rs2066842，rs75932628的试剂盒，还涉及一种检测帕金森病和脑白质疏松症相关突变：rs2066842，rs75932628的方法，以及上述方法和上述试剂盒在检测帕金森病和脑白质疏松症相关突变：rs2066842，rs75932628的应用。

背景技术

随着老龄化的加剧，老年性疾病的患病率日益增加，帕金森病和脑白质疏松症是两种常见的老年性疾病。在超过65岁的老年患者中男性的发病率为1.6%，女性的发病率为1.7%，全球400万患者中有170万人在中国，患病率与欧美国家接近。此报告于2005年公布在《The Lancet》杂志上（Zhang ZX,Roman GC,Hong Z,Wu CB,Qu QM,Huang JB,Zhou B,Geng ZP,Wu JX,Wen HB et al:Parkinson's disease in China:prevalence in Beijing,Xian,and Shanghai.Lancet2005,365(9459):595-597.），并得到了杂志编委们的高度评价。该调查还发现，在边远地区及农村，帕金森病误诊率较高，这极有可能是导致既往患病率低的原因之一。帕金森病患者一般在病理分期达3～4期时才会出现典型的运动症状，一般此时多巴胺能神经元减少50%，多巴胺水平降低达70%～80%，但是由于神经元的不可再生特点，此时患者已错过了治疗的最佳时机。因此，积极寻找具有早期诊断价值的生物学标志物，在多巴胺能神经元存活时即明确诊断帕金森病已成为目前研究的热点之一。

脑白质疏松症是一个放射学术语，用于描述脑室周围或皮质下区脑白质在计算机断层扫描（CT）或磁共振成像（MRI）上的表现，根据病变范围的大小可分为轻、中、重度。有研究表明，脑白质疏松症的发生与年龄因素密切相关，年龄越大，发病率越高。特别是近年来，随着CT和MRI的广泛应用，脑白质疏松症越来越多地在中、老年人中被发现。2011年全基因组关联研究（GWAS）发现单核苷酸突变是导致脑白质疏松症的遗传因素之一（Fornage M,Debette S,Bis JC,Schmidt H,Ikram MA,Dufouil C,Sigurdsson S,Lumley T,DeStefano AL,Fazekas F et al:Genome-wide association studies of cerebral white matter lesion burden:the CHARGE consortium.Ann Neurol2011,69(6):928-939.）。

基因单核苷酸多态性（SNP）是导致帕金森病发生的遗传因素之一。当DNA链中发生单个碱基的突变，且突变导致一个原有酶切位点的丢失或形成一个新的酶切位点，这样就可以用限制性长度多态性（RFLP）进行基因型分析。SNP可以影响人类疾病的发展和对病原体，化学品，药品，疫苗等的机体反应。SNP也是个性化医疗的关键。同时，这些遗传变异也构成了我们对疾病易感性的差异。我们的身体对疾病的严重程度及治疗的效果在临床中也表现为遗传变异性。例如，载脂蛋白E（APOE）的单碱基突变与更高的老年痴呆症相关。

一般实验室常用琼脂糖凝胶电泳展示RFLP的结果，但由于其分辨率低和制备繁琐，不利于大批量样本的操作。毛细管电泳是90年代初发展起来的新技术，具有分辨率高、重现性好、灵敏度高、快速和易于实现自动化的特点。后来又发展了激光诱导荧光检测器，大大提高了分析灵敏度，对微量样品如单细胞分析等，具有很大的优势。毛细管电泳可以应用于DNA点突变的检测，而且在20分钟内就能完成几千个碱基的DNA片段的突变分析。在PCR基础上利用毛细管电泳技术对DNA已知点突变及未知点突变的检测发展十分迅速，已经应用于基因突变引起的遗传疾病的临床诊断和法医检验。

发明内容

本发明的目的是提供快速、简便、准确、经济的一种帕金森病和脑白质疏松症的突变检测试剂盒及其检测方法，本发明可检测rs2066842，rs75932628两个突变点。

所述帕金森病和脑白质疏松症的突变检测试剂盒，设有包装盒、两对引物序列、PCR扩增反应试剂、酶切反应试剂、阳性标准品和阴性标准品；

所述两对引物序列为：

rs2066842的正向引物F1：AGCCCATTGTCTGGTTAGGT；

rs2066842的反向引物R1：ACAGTGTCCGCATCGTCAT；