[发明专利]帕金森病和脑白质疏松症的突变检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.帕金森病和脑白质疏松症的突变检测试剂盒，其特征在于设有包装盒、两对引物序列、PCR扩增反应试剂、酶切反应试剂、阳性标准品和阴性标准品；

所述两对引物序列为：

rs2066842的正向引物F1：AGCCCATTGTCTGGTTAGGT；

rs2066842的反向引物R1：ACAGTGTCCGCATCGTCAT；

rs75932628的正向引物F2：ATCATGGGGTTGTAGATTCCG；

rs75932628的反向引物R2（CCACAACACCACAGTGTTCCA；

所述PCR扩增反应试剂包括脱氧单核苷酸（dNTP）、10×PCR缓冲液、MgCl₂、无菌双蒸水和DNA聚合酶（Taq酶）；

所述酶切反应试剂包括限制性内切酶BamHI和限制性内切酶HhaI，100×牛血清蛋白（BSA），10×酶切缓冲液；

所述阳性标准品是含有rs2066842和rs2066842双链DNA突变的质粒；

所述阴性标准品是连接正常目的DNA序列的质粒。

2.如权利要求1所述帕金森病和脑白质疏松症的突变检测试剂盒，其特征在于所述PCR扩增反应试剂由1ml的脱氧单核苷酸（dNTP）、1ml的10×PCR缓冲液、1ml的MgCl₂、2ml的无菌双蒸水和50μl的DNA聚合酶（Taq酶）组成；所述PCR缓冲液的组成为100mM pH8.3Tris-HCl，500mM KCl。

3.如权利要求1所述帕金森病和脑白质疏松症的突变检测试剂盒，其特征在于所述酶切反应试剂由200μl的限制性内切酶BamHI和200μl的限制性内切酶HhaI，100μl的100×牛血清蛋白，1ml的10×酶切缓冲液组成；所述酶切缓冲液的组成为100mM pH7.9Tris-HCl，100mM NaCl，10mM MgCl₂，1mM的DTT。

4.如权利要求1所述帕金森病和脑白质疏松症的突变检测试剂盒，其特征在于所述阳性标准品为500μl；所述阴性标准品为500μl。

5.如权利要求1所述帕金森病和脑白质疏松症的突变检测试剂盒，其特征在于rs2066842和rs75932628的引物分别扩增或同时在一个PCR管中扩增。

6.如权利要求1所述帕金森病和脑白质疏松症的突变检测试剂盒在检测金森病和脑白质疏松症相关突变rs2066842，rs75932628中的应用。

7.如权利要求6所述应用，其特征在于所述帕金森病和脑白质疏松症的突变检测试剂盒在检测金森病和脑白质疏松症相关突变rs2066842，rs75932628中应用的检测方法如下：

（1）特异性PCR扩增：使用Primer5.0软件和Oligo7.0软件根据人类CARD15基因（Gene ID:64127）和TREM2基因（Gene ID:54209）序列获得分别包含rs206684和rs75932628的特异性PCR扩增产物；

（2）酶切鉴定：将上述的特异性PCR扩增产物，分别用限制性内切酶BamHI和HhaI进行酶切；

（3）突变检测：联合毛细管电泳检测，直接根据酶切片段的数量和酶切片段的大小，检测这两个位点是否发生了突变以及突变类型。