[发明专利]特异性测定IgM和IgG和IgA血型抗体的试纸条

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，公开了一种采用免疫层析试纸技术特异性测定IgM和IgG和IgA抗-A和抗-B血型抗体及其效价的方法，可用于测定IgM抗-A和抗-B抗体效价监测骨髓移植植入，测定个体特别是孕妇产前及新生儿免疫性IgG抗-A和抗-B抗体的效价，特异性测定IgM抗-A和抗-B抗体可准确判断血型的反定型，特异性测定分泌液中的IgA抗-A和抗-B抗体可无需采血通过唾液等判断个体的血型的反定型。 

背景技术

免疫层析试纸技术从上个世纪八十年代至今，已被广泛用于各种传染病因子、抗体、激素、酶、肿瘤标志物和药物的检测，该技术的基本要领和操作方法，已被广泛公开于国内外教科书、文献、网络等媒体或载体，其基本原理为，当样品加入到样品区后，延试纸条迁移至示踪垫时，样品中的被测因子与示踪物结合成“复合物”，并继续延试纸条迁移至检测区，被包埋在检测区的特异性结合物捕获，示踪物以颜色显示出条带，多余的或其它的“复合物”继续迁移至质控区，与包埋的特异性结合物形成质控条带，提示检测有效，最后根据检测区是否出现条带或条带颜色，判读被测因子阴性或阳性或半定量值或定量值。 

检索中国专利，有众多专利都采用免疫层析试纸技术建立特定的检测方法，这些专利所采用的免疫层析试纸技术基本一致，所不同的是，或者检测的样本不同、或者检测的因子不同、或者检测的目的不同，也或者检测因子和检测目的均相同，但检测的方式不同，如有的采用双抗原夹心法、有的使用双抗体夹心法等。 

关于ABO血型，其测定方法包括正定法和反定法，正定是测定红细胞上的A、B血型抗原，反定是测定血清中的抗-A、抗-B血型抗体，血型抗体包括IgM类和IgG类和IgA类抗体。目前血型测定最广泛或者说一般都是采用凝集法，其原理是利用血型抗原和抗体反应引起肉眼可见的红细胞凝集来判断结果，正定时，使用IgM抗-A或抗-B试剂检测样本的红细胞抗原；反定时，使用已知A或B型的红细胞试剂测定样本血清中的IgM血型抗体。凝集法时间快、成本低、准确率极高，是血型鉴定的标准方法，但是，凝集法如果不事先对样本进行特殊处理，尚不能直接测定血型抗体，也不能特异性测定不同类别的血型抗体，更不能测定其抗体效价。 

中国专利中，有多个专利采用免疫层试纸技术测定ABO血型，如发明专利申请号02159979.3、实用新型专利申请号200920041078.2、实用新型专利申请号200920041080.X和实用新型专利申请号200720079592.6是测定样本红细胞的血型抗原，即血型的正定型；上述实用新型专利200720079592.6、以及发明专利申请号200910158167和申请号201310394101.7是测定样本血清中的血型抗体，即血型的反定型，而且均是使用“纤维膜载体进行抗原-抗体反应”来完成测定的。 

这几个测定血型抗体的专利中，发明专利申请号201310394101.7是采用“纤维膜载体+酶联免疫酶显色”方法，实用新型专利申请号200720079592.6和发明专利申请号200910158167则是采用“纤维膜载体+免疫层析示踪粒子显色”的方法，但它们均是测定人血清中的混合血型抗体，并不能特异性检测IgM或IgG类或IgA类血型抗体，更不能测定抗体的效价。 

文献检索，目前国内外尚未见采用免疫层析试纸技术，特异性测定IgM或IgG类或IgA类血型抗体及其效价的报道，也未见现有商业试剂盒，亦未检索到相关的中国专利。 

本申请同样采用免疫层析试纸技术，但特异性测定IgM或IgG或IgA血型抗体及其效价。特异性测定IgM时，可用于血型反定，将与凝集法同步（凝集法测定IgM抗体），排除IgG等抗体的干扰，降低HOOK效应，可大大提高测定结果的准确性和稳定性；特异性测定IgM抗体效价时，可监测骨髓移植的植入是否成功，将是最简单和最直接的证明，也可用于输血医学的科学研究；特异性测定IgG血型抗体时，可测定IgG抗体的效价或半定量或定量值，可用于个体特别是孕妇及新生儿免疫性抗-A或抗-B抗体效价的测定，预防ABO血型新生儿溶血病（HDN）；特异性测定分泌液中的IgA抗-A和抗-B抗体时，可通过唾液等分泌液来测定个体的血型的反定型，无需采集血液样本，也无需对唾液进行特殊处理，可使血型测定进入家庭自测或自我测定（DIY），而以往唾液测血型约20%的非分泌性个体无法检测。同时，本申请设计的免疫层析试纸技术，不需要对人的血液样本进行血清分离，不需要凝集法必须的离心机等设备，操作也相对简单，省时省力准确。 

发明内容