[发明专利]一种阳离子脂质体及其制备方法和应用

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种阳离子脂质体及其制备方法和应用。

【背景技术】

非病毒基因载体是基因治疗中目前最有潜力的载体之一，特别是阳离子脂质体，具有相对于病毒基因载体由于其可以大批量生产且生产成本低、可重复、安全性高、低免疫源性、生物相容性好，同时可以载入大小达52kb的外源基因片段等优点。目前该载体已成为基因治疗的研究热点之一。

虽然目前阳离子脂质体主要由于带较高电荷，可致细胞发生如胞质收缩、抑制正常细胞分裂、抑制蛋白激酶活性、在胞质中产生空泡等毒性，但是通过对阳离子脂质体进行修饰或加入阴性高聚物、辅脂、寻找最佳N/P等手段可以获得高转染率、高的靶向性、低细胞毒性的阳离子脂质体。其在临床上已得到越来越多的应用。其中以阳离子脂质体DMRIE/DOPE为基因载体，将囊性纤维化基因(pGT21)转运至靶细胞，现已处于临床Ⅰ期研究阶段；目前在德国载有紫杉醇的DOTAP阳离子脂质体已进入临床II期试验。

至今癌症仍然是不可治愈之症，无论在发达国家还是发展中国家均成为生命的主要杀手。在癌症诱发、促发、恶化的整个过程中，由于其为扩张性、弥漫性侵蚀生长模型，同时整个过程发生机制极其复杂，目前尚未找到一种有效治疗方法。传统癌症治疗方法，如外科、化疗、放疗等，在大多情况下治疗效果仍然是不理想，因为癌症外科手术后有很大复发可能性，化疗的毒副作用及超过一半的癌症都会产生多药耐药性，放疗对正常组织会有严重杀伤作用，这些均是传统癌症治疗所面临的主要挑战，因此新型、有效的癌症治疗策略亟待出现。阳离子脂质体(cationicliposome,CLP)常由荷正电的磷脂（cationiclipids）与中性辅助磷脂(co-lipids)共同组成。由于带正电的脂质与荷负电的核酸（DNA、RNA、寡聚核苷酸（AODNS））静电作用形成阳离子脂质体-基因复合物（lipoplexes），再与化疗药物可形成阳离子脂质体-基因-化疗药物三元复合体，通过皮下注射或是腹腔注射，进行血液循环进入靶器官，并与荷负电的细胞膜表面作，通过内吞作用或细胞融合作用过进入胞内，经过一系列运输，最后进入细胞核，进行相关基因表达、沉默（敲除）与药物治疗作用。目前常用的基因载体分为病毒基因载体与非病毒基因载体两类。常见的非病毒基因载体如阳离子高聚物、磷酸钙、阳离子多肽及阳离子脂质体等。其中发展最为成熟的是阳离子脂质体。但缺点是其转染效率仍然低于病毒基因载体，因此有必要研制安全性与转染活性更佳的新型脂质体，采用阳离子脂质体共载基因与化疗药物进行联合治疗，以发挥更好治疗效果。

联合治疗模型即共载化疗药物与基因，无论在体内还是体外实验中均已证明该模型能够有效抑制肿瘤长、繁殖、扩散。特别是在多药耐（multidrug-resistant，MDR）癌症中发挥更明显作用。近三年来，阳离子脂质体被研究学者广泛用于共载基因与化疗药物进行癌症的联合治疗。

目前，本领域已有试图通过联合多基因进行癌症治疗的报道，并在体外实验取得一定效果。但是基因干扰技术的瓶颈之一为基因本身的毒性，因此有必要将基因与化疗药物进行共载，特别是在MDR肿瘤模型中，共载基因与药物载体体内外实验结果表明：共载基因与化疗药物阳离子脂质体比单包载基因或化疗药物阳离子脂质体进行治疗，疗效更佳，表现出协同增效作用。

【发明内容】

本发明要解决的技术问题之一，在于提供一种阳离子脂质体，其稳定性与转染基因后的转染效率得到了很大的提高。

本发明是这样实现上述技术问题之一的：

一种阳离子脂质体，所述阳离子脂质体由以下重量份的组分采用逆向蒸发法制备而成：1重量份DOPE、1重量份DC-Chol、2.5重量份OQCMC。

本发明要解决的技术问题之二，在于提供一种阳离子脂质体的制备方，该方法制备的阳离子脂质体稳定性与转染基因后的转染效率得到了很大的提高。

本发明是这样实现上述技术问题之二的：

一种阳离子脂质体的制备方法，包括以下步骤：

步骤10、按配比取1重量份DOPE、1重量份DC-Chol、2.5重量份OQCMC溶于三氯甲烷溶剂中；

步骤11、将步骤10得到的溶液拌匀，加入超纯水共混，探头超声10min；

步骤12、将步骤步骤11得到产物在旋转蒸发仪将残留溶剂去除，真空状态，即得；所述旋转蒸发仪的蒸发温度为35℃。

本发明要解决的技术问题之三，在于提供一种阳离子脂质体复合体，其能大大减少化疗药物的使用剂量，减少病人的给药次数，大大增加病人的顺延性。