[发明专利]定点突变的戊型肝炎病毒结构蛋白及其制备方法和应用无效
| 申请号： | 201410132322.1 | 申请日： | 2014-04-02 |
| 公开（公告）号： | CN103897044A | 公开（公告）日： | 2014-07-02 |
| 发明（设计）人： | 孟继鸿;徐明杰 | 申请（专利权）人： | 东南大学 |
| 主分类号： | C07K14/08 | 分类号： | C07K14/08;C12N15/51;C12N15/81;C12N1/19;A61K39/29;A61P31/14;C12R1/84 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 柏尚春 |
| 地址： | 211189 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 定点 突变 肝炎 病毒 结构 蛋白 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种戊型肝炎病毒结构蛋白ORF2的第439～617位氨基酸中第562位氨基酸的定点突变体，分别为p179N562Q，p179N562D，p179N562P，p179N562Y，其特征在于，所述氨基酸序列分别如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8所述。
2.根据权利要求1所述的定点突变体，其特征在于，所述p179N562Q，p179N562D，p179N562P，p179N562Y的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7所述。
3.一种重组质粒，其特征在于，包含权利要求2所述的定点突变体的核苷酸序列。
4.根据权利要求3所述的重组质粒，其特征在于，所述重组质粒分别为pPICZαA/p179N562Q，pPICZαA/p179N562D，pPICZαA/p179N562P和pPICZαA/p179N562Y。
5.一种基因工程菌株，其特征在于，它包含有权利要求4所述的重组质粒。
6.根据权利要求5所述的基因工程菌株，其特征在于，所述基因工程菌株为巴斯德毕赤酵母菌株。
7.一种戊型肝炎病毒结构蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）PCR扩增获得p179N562、p179N562Q、p179N562D、p179N562P、p179N562Y的目的基因；
2）构建重组质粒pPICZαA/p179N562，pPICZαA/p179N562Q，pPICZαA/p179N562D，pPICZαA/p179N562P和pPICZαA/p179N562Y；
3）将重组质粒电转化至巴斯德毕赤酵母菌株获得重组工程菌；
4）将重组工程菌利用甲醇诱导表达重组蛋白并通过硫酸铵盐析法纯化获得目的蛋白。
8.权利要求7所述的制备方法制备的戊型肝炎病毒结构蛋白。
9.权利要求8所述的戊型肝炎病毒结构蛋白在制备戊型肝炎疫苗方面的应用。
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