[发明专利]一株副干酪乳杆菌坚韧亚种菌株、筛选方法及用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种副干酪乳杆菌坚韧亚种FX-6-1 (Lactobacillus paracasei subsp. tolerans FX-6-1)菌株，特别是涉及一种可以抑制大肠杆菌(Escherlchia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)等细菌病原微生物及黄曲霉（Aspergillus flavus）、黑根霉（Rhizopus nigricans）等霉菌的等病原菌的副干酪乳杆菌坚韧亚种菌株，以及含有该副干酪乳杆菌坚韧亚种菌株发酵产生的抑菌组合物及该组合物的活性稳定性，属于微生物技术领域。 

技术背景

在加工、贮藏、运输及消费过程中，导致食品腐败变质的原因较多，有物理因素、化学因素和生物性因素，其中由微生物污染所引起的食品腐败变质是最为重要和普遍的。微生物广泛分布于自然界，食品及原料中不可避免的会受到一定类型和数量微生物的污染，当环境条件适宜时，它们就会迅速生长繁殖，造成食品的腐败与变质。据估计，在世界范围内每年有超过20%的食品由于腐败变质而白白浪费(曹妍等，2011)，尤其是微生物污染导致的腐败最为严重。 

 微生物滋生导致食品腐败变质的同时，也给食品安全带来严重危害。全球每年发生40-60 亿例食源性疾病，发展中国家每年约有180 万人死于食源性疾病，在发达国家，每年亦有10%以上的人群感染食源性疾病(吴燕燕等，2009)。美国和欧洲曾分别因火鸡污染沙门氏菌和豆芽菜污染大肠杆菌O104(Frank et al, 2011)而爆发严重的食品安全事件。在中国，仅2012年就爆发了6685起食物中毒事件，而56.1%的事故原因是由微生物污染引起(Lam et al, 2013)。 

虽然传统的加热杀菌可以有效抑制微生物的污染，但在杀菌的同时也不同程度的破坏了食品的营养、质地以及色香味型，同时产生大量能耗。在现代食品工业中，食品防腐剂被广泛应用于延长食品的保藏期，已成为现代食品生产中一种不可缺少的食品添加剂。 

  而在现代食品工业以及种植、养殖业中，化学防腐剂、杀虫剂及抗生素的不规范使用及残留隐患已越来越引起消费者关注，人们更倾向于消费天然来源的食品资源。因此，开发不易产生耐药性且无残留、无安全隐患的新型天然抗菌物质具有重要的现实意义， 而作为天然来源的蛋白质类抗菌物质成为急需的替代品，成为近年来研究的热点。 

西藏开菲尔主要生长在我国西部高海拔地区，是极具地方特色的发酵乳产品，具有增强人体免疫力、抗肿瘤、降血压、降血脂等多种功效。西藏开菲尔中主要包含乳酸菌和酵母菌。从西藏开菲尔中分离筛选产抗菌物质菌株，对开发我国传统微生物资源具有重要意义。 

针对食品工业中化学防腐剂存在的问题以及对广谱高效天然防腐保鲜剂的需求状况，本发明从西藏开菲尔乳中筛选能产生抗菌活性高、抗菌谱广的抗菌菌株，旨在获得广谱高效的新型抗菌物质及推动其开发和应用。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种副干酪乳杆菌坚韧亚种FX-6-1(Lactobacillus paracasei subsp. tolerans FX-6-1)菌株及其发酵抑菌组合物。该发酵抑菌组合物具有良好的抗菌活性。 

本发明所提供的菌株筛选自西藏开菲尔（Tibetan kefir）发酵乳。该副干酪乳杆菌坚韧亚种FX-6-1(Lactobacillus paracasei subsp. tolerans FX-6-1)菌株已经保藏于于2014年02月23日保藏于位于武汉市武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2014043。其筛选方法是：采用选择性培养基MC固态培养基及MRS固态培养基初筛得到乳酸菌，随后将筛选到的乳酸菌接种至纯牛奶中发酵培养以获取发酵组合物。以大肠杆菌为指示菌，采用牛津杯琼脂扩散法对发酵组合物进行抑菌活性试验检测，筛选到良好抗菌活性的副干酪乳杆菌坚韧亚种FX-6-1(Lactobacillus paracasei subsp. tolerans FX-6-1)菌株。