[发明专利]一种杭白菊组织培养及繁殖的方法

说明书

（一）技术领域

本发明涉及植物组织培养技术，特别涉及一种杭白菊的组织培养和快速繁苗方法，通过这种方法，可以进行优良种苗规模生产。

（二）背景技术

杭白菊（Chrysanthemum morifolium Ramat）是产于我国浙江的一种药食两用的菊科草本植物，是浙江省八大名药材“浙八味”之一。杭白菊既可作药材，又可制作成饮料供饮用，还可作庭院观赏。杭白菊花中含有挥发油、黄酮类、多酚类、菊甙、嘌呤、胆碱、水苏碱、维生素A、维生素B和氨基酸等。中西医的研究表明，杭白菊具有散风清热，平肝明目，解毒消炎、提神利尿的作用，可用于治疗湿热黄疸、胃痛食少、水肿尿少等症，对中枢神经也有镇静作用。若以菊汤沐浴，有去痒爽身、护肤美容的功能。经常饮用杭白菊，还能增强毛细血管抵抗力，抑制毛细血管的通性，起到抗炎强身的作用。近几年研究发现，杭白菊中还含丰富的镍、锌、铁元素，尤其是铁元素含量很高。铁是细胞中的重要组成成分，细胞新陈代谢中许多酶的活性均需要铁或需要铁作为辅助因子，铁元素在协调锌、钙、镁的体内代谢和人体免疫防御功能方面有重要作用。杭白菊的提取物对金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌、变形杆菌、伤寒杆菌、霍乱弧菌、乙型溶血链球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、流感病毒均有抑制作用。

新的研究还发现杭白菊具有治疗高血压、偏头痛、急性结膜炎等功效。因此，杭白菊除了作为食品饮料、保健品以外，还被开发为新型的抑菌和抗高血压药物，受到越来越广泛的关注。

目前杭白菊的繁殖主要采用扦插繁殖和分株繁殖，繁殖时间长，繁殖系数低，无法满足日益高涨的生产和市场需求。病毒病是杭白菊种植过程中的重要病害之一，而杭白菊扦插繁殖和分株繁殖这些繁殖方法易导致病毒的感染和传播，并且世代相传，逐年加重，致使其品种严重退化，许多杭白菊的优良品种资源得不到保护和利用，直接影响了其花的产量和质量，使杭白菊的经济效益受到一定影响。

生物技术的快速发展，特别是植物组织和细胞培养技术，为杭白菊的快速繁殖育种研究提供了重要基础。因此，寻找一种快速高效的杭白菊繁殖方法是非常必要的。

目前国内外对杭白菊组织培养的研究报道均是以叶片、叶柄、下胚轴、茎段和花瓣为外植体进行杭白菊的组织培养（罗紫娟，1987；张媛，2008；郅慧，2004；牛颜冰，2007；张娜，2009），但是这些方法均不能有效的脱去杭白菊体内的病毒，虽然郅慧使用茎尖进行了培养，但是先产生大量愈伤组织，然后从愈伤组织分化成不定芽，通过这个过程获得的不定芽在增殖过程中容易出现变异，影响了种苗原有优良遗传性状。本发明是以杭白菊芽繁芽的方式直接诱导分化，再诱导侧芽分化不定芽进行增殖，通过这种途径获得的不定芽能有效避免继代增殖过程中出现的变异，更好地保持母株原有的优良性状。

（三）发明内容

本发明目的是提供一种杭白菊的组织培养和离体快速繁殖的方法，使得在短期内可以获得大量的优质杭白菊种苗，满足市场的需要。

本发明采用的技术方案是：

一种杭白菊组织培养及繁殖方法，所述方法按如下步骤进行：

（1）无菌材料的获得及诱导培养：切取长势良好、无病虫害的杭白菊幼嫩的腋芽，用自来水冲洗0.5～2h，然后在体积浓度为1%洗洁精的水溶液中振摇2～5mins，用无菌水冲净；在超净工作台上用体积浓度70～75%乙醇水溶液浸泡30～60s，然后用混合消毒液浸泡10～20mins，再用无菌水冲洗3～5遍；在灭菌的滤纸上吸干水分，用解剖刀剥取0.3～0.6mm的腋芽尖，然后将腋芽尖接种到装丛生芽诱导培养基的培养瓶中，盖上瓶盖并用封口膜封住瓶口，置于培养箱中，在24～26℃，光照1500～2500lx条件下培养15～25天；所述混合消毒液为体积比1：200的吐温20和84消毒液的混合液；所述丛生芽诱导培养基为添加6-BA（即6-苄氨基腺嘌呤）1.0～3.0mg/L、NAA（即萘乙酸）0.05～0.5mg/L和谷氨酰胺80～120mg/L的MS基本培养基；