[发明专利]一种测定茶叶中草甘膦和草胺膦农药的前处理方法

说明书

技术领域

       本发明属于农药残留量测定领域，涉及一种测定农药残留量的前处理方法，具体涉及一种测定茶叶中草甘膦和草胺膦农药的前处理方法。

背景技术

       农药残留是指在农业生产中施用农药后一部分农药直接或间接残存于谷物、蔬菜、果品、水产品以及土壤和水体中的现象，农药残留问题是随着农药大量生产和广泛使用而产生的。草甘膦是一种优良的灭生性高效除草剂，也是现在国际上使用最广泛的有机磷除草剂。草铵膦是继草甘膦之后又一性能优良的灭生性除草剂。氨甲基磷酸则是草甘膦的主要代谢产物。草甘膦和草铵膦作为新型有机磷除草剂，曾长期被认为是一种低毒、安全的除草剂，被广泛用于农业、林业和园艺等领域。但近年来，许多研究表明草甘膦对生物具有一定的毒性，并在遗传方面产生影响，因此草甘膦和草铵膦的检测越来越受到关注，世界各国都加强了对食品中草甘膦和草铵膦残留的检测。

       国标GB 2763-2012 “食品安全国家标准食品中农药最大残留限量”规定了茶叶中草铵膦的最大限量为0.5mg/kg，草甘膦的最大限量为1mg/kg。农产品中草铵膦和草甘膦残留的检测，通常采用经柱前衍生-液相色谱串联三重四极杆质谱的检测方法，但茶叶是一种较为特殊的复杂样品，样品中含有大量的茶多酚、色素和糖类物质，在样品的衍生反应过程中，这些物质会干扰反应产物的生成，从而影响草甘膦和草铵膦的定性与定量。因此如何解决干扰物质，提高衍生效率，是准确测定茶叶中草甘膦和草胺膦的关键。

发明内容

       本发明的目的是提供一种测定茶叶中草甘膦和草胺膦农药的前处理方法，通过以下步骤进行：

（1）提取：称取2.0 g茶叶试样于50mL离心管，加入0.5 mol/L KOH溶液15mL，将pH调至13以上，摇匀静置30min。经4000 rpm 离心10min，过滤得到滤液，取滤液3 mL至10 mL离心管，加入强酸溶液调样品液pH至7以下，振荡均匀后经4000 rpm 离心10min，得到提取液。

（2）净化：移取提取后上清液1 mL至60 mg  oasis HLB固相萃取小柱(小柱活化：先加2 mL甲醇冲洗，再加2 mL水活化)，进行固相萃取，得到固相萃取液。

（3）离心：移取固相萃取液1 mL至5 mL离心管，加入1 mol/L KOM溶液0.25 mL摇匀，再添加0.48 mL硼酸钠缓冲溶液，摇匀加入0.18 mL FMOC-CL衍生溶液，振荡均匀后静置过夜。将衍生后液体试样10000转离心10min，经0.45μm水系滤膜，供液相色谱-串联质谱分析。

       强酸选用盐酸、硫酸和硝酸，或三者任意比例的混合物。优选用5 mol/L盐酸溶液0.5 mL。

HLB固相萃取小柱为60 mg HLB填料。

本发明的另一个目的是提供所述方法在测定茶叶中草甘膦和草胺膦农药中的应用。

本发明采用酸化沉淀、固相萃取和液质联用仪测定结合，建立了茶叶中草甘膦和草胺膦残留量的液质联用仪测定前处理方法。酸化沉淀的作用是使茶叶中大量茶多酚沉淀，这样在固相萃取时，茶多酚就不会影响草甘膦和草胺膦的萃取，提高固相萃取液与氯甲酸-9-芴基甲酯的衍生效率；而液质联用选择MRM检测模式，大大降低了杂质的干扰，具有较高的灵敏度。该方法在10~4000μg/L浓度范围内，不同茶叶基质中草甘膦、草铵膦、氨甲基磷酸有较好的线性关系（r＞0.99）。在衍生标准样浓度0.1、0.8和4mg/kg添加水平下，三种物质回收率均介于78.1%~96.3%之间，相对变比系数RSD（n=7）低于10%，按10倍信噪比（S/N）计算，草甘膦、氨甲基磷酸、草铵膦定量限（LOQ)分别为0.075mg/kg、0.050mg/kg、0.050mg/kg。该方法准确、高效、稳定，能够满足残留检测的需要。

具体实施方式

本发明集合实施例作进一步的说明，实施例仅为解释性的，决不意味着它以任何方式限制本发明的范围。

实施例1      

一种测定茶叶中草甘膦和草胺膦农药的前处理方法，通过以下步骤进行：

（1）提取：称取2.0 g茶叶试样于50mL离心管，加入0.5 mol/L KOH溶液15mL，将pH调至13以上，摇匀静置30min。经4000 rpm 离心10min，过滤得到滤液，取滤液3 mL至10 mL离心管，加入5 mol/L盐酸溶液0.5 mL强酸溶液调样品液pH至7以下，振荡均匀后经4000 rpm 离心10min，得到提取液。