[发明专利]用于叶酸过表达癌细胞快速检测的比色方法

说明书

技术领域

本发明涉及癌细胞的检测方法，具体地说是一种基于Au@PtPd纳米材料制备用于比色方法测定癌细胞。

背景技术

肿瘤的发生严重影响着人们的生活质量，危及着人们的生命安全，实现肿瘤细胞及其生理活动的准确、快速、简便检测，对于疾病的确诊与治疗具有非常重要的意义。目前，有关检测方法已有一些报道，但普遍操作繁琐费时、不易定量、仪器昂贵，且要求工作人员有较高的专业技能。因此实现目标物的高灵敏、快速、简单测定癌细胞有着非常重要的意义。目前对细胞检测流式细胞术是一种能够对细胞或亚细胞结构进行快速检测的新型分析和分选技术，其主要特点是检测速度快，并且可进行多参数测量。随着流式细胞术研究的逐步深入和成熟，其应用范围已经从科学研究扩展到临床诊断，在临床医学领域里有着极大的应用潜力。但是，由于其昂贵的分析成本（仪器价格、试剂盒时间消耗等）及对操作人员专业训练的严格要求，这种分析技术只能在条件比较完善的大型实验室或检测不能才能实现。同时，由于这类仪器一般还具有较为庞大的体积，因此也在一定程度上限制了其应用和普及。

细胞检测方法的发展离不开新的材料和技术，没有材料和技术的新突破，就很难有细胞检测方法的研究进展。纳米材料在生物分子检测中的应用一直是生物分析化学领域研究的热点问题之一，利用纳米材料特殊的表面效应、体积效应、量子效应等可以在生物分子检测中明显地提高分析与检测的灵敏度和选择性，因此在生物医学等领域有着非常广阔的应用前景。近年来，利用纳米材料和纳米技术，并将纳米生物传感器与生化检测技术相结合，进行癌症的早期诊断与靶向治疗的研究，是相关生物技术领域中的研究前沿。基于细胞受体的细胞传感器是直接或者间接以细胞表面的受体作为识别元件与待测目标特异性结合，当待测目标与细胞表面受体结合后，细胞内部会发生一系列级联反应，信号转换器会将这些反应装化为可检测的信号，从而达到获取该反应机制的功能性信息的目的。大部分细胞传感器在生物识别的起始阶段都是直接或间接的利用细胞受体，所以，细胞受体对于新型细胞传感系统的开发意义重大。自从发现叶酸受体在绝大多数恶性肿瘤细胞中高度表达，而在正常细胞高度保守以来，叶酸/叶酸受体介导靶向传递成为该领域研究的热点。一种Au@PtPd纳米材料用于催化显色剂显色，实现通过显色对细胞进行检测。

发明内容

本发明的目的在于提供一种叶酸过表达癌细胞快速检测的方法，所述的癌细胞的快速检测方法是利用Au@PtPd纳米材料催化显色剂显色方法。

所述的癌细胞的快速检测方法检测过程如下：

（1）将金纳米颗粒与不同比例的K₂PtCl₆和H₂PdCl₄混合制备出Au@PtPd纳米材料；

（2）利用6-巯基-己醇和叠氮-11-烷基-硫醇对Au@PtPd纳米粒子表面修饰，通过点击化学技术与炔基化的叶酸进行偶合；

（3）叶酸受体靶向的叶酸/Au@PtPd纳米材料与癌细胞进行孵育，离心分离；

（4）取（3）悬浮液与显色剂混合，加入显色剂溶液底物；

（5）比较（4）得到溶液颜色，将其溶液滴在色谱纸亲水区（样品区）上，晾干，扫描仪扫描对其色度分析。

所述的癌细胞的快速检测方法具体检测步骤如下：

（1）所述Au@PtPd纳米材料制备方法，量取80mL去离子水于三口烧瓶中，加热至90℃，加入0.8mL 1%的HAuCl₄，加热至96℃并保持一分钟，之后加入2.8 mL 1%柠檬酸钠，继续搅拌15min，自然冷至室温；秤取0.048g K₂PtCl₆于50 mL水中，0.035 g PdCl₂溶于2 mL 0.2 mol/L的盐酸并加水稀释至100 mL；取5 mL金纳米溶液与40 μL 2mmol/L K₂PtCl₆和40 μL 2mmol/L  H₂PdCl₄溶液混合，加入10倍量的抗坏血酸，剧烈震荡，溶液颜色由棕色变为灰色。