[发明专利]一种抗ZEN卵黄抗体及其制备方法

权利要求书

1.一种抗ZEN卵黄抗体，其特征在于，该抗体采用以下步骤制备：

（1）利用Thouvenot法和碳二亚胺法，人工合成ZEN-BSA抗原；

（2）将人工合成ZEN-BSA抗原对蛋鸡免疫接种，免疫3~5次后收集鸡蛋；具体包括以下步骤：

（2-1）将步骤（1）制备的ZEN-BSA抗原粉末溶于PBS中，然后将溶解有ZEN-BSA的PBS与佐剂乳化制得免疫用ZEN-BSA抗原；

（2-2）将步骤（2-1）制得的免疫用ZEN-BSA抗原免疫接种蛋鸡3~5次；

（2-3）免疫接种蛋鸡完成后2~3周收集鸡蛋，持续收集1~2个月，收集的鸡蛋4℃保存；

（3）从步骤（2）获得鸡蛋中分离纯化ZEN卵黄抗体；具体包括以下步骤：

（3-1）将步骤（2）获得的鸡蛋外壳消毒，打蛋收集蛋黄；

（3-2）将步骤（3-1）收集的蛋黄加入无菌双蒸水稀释，充分混匀，调节pH值，4℃条件下静置12~24小时；

（3-3）将步骤（3-2）的混合液离心，收集得到N升上清液；

（3-4）将步骤（3-3）收集的上清液缓慢加入硫酸铵，混匀溶解；4℃放置 12~24h，离心弃上清，收集沉淀；

（3-5）将步骤（3-4）收集的沉淀用去离子水稀释溶解恢复到N升后，加入硫酸钠，混匀溶解，置室温过夜，离心弃上清，用去离子水溶解沉淀恢复至N升后，亲和层析柱纯化，滤膜除菌，即得无菌抗ZEN卵黄抗体提取液；

（3-6）将步骤（3-5）所得无菌抗ZEN卵黄抗体提取液真空冷冻干燥得抗ZEN卵黄抗体干粉成品。

2.如权利要求1所述抗ZEN卵黄抗体，其特征在于，步骤（2）中所述蛋鸡为21~23周龄健康产蛋母鸡。

3.如权利要求1所述抗ZEN卵黄抗体，其特征在于，步骤（2）中所述免疫为皮下和肌肉多位点接种免疫，免疫4次，第一次免疫接种一至两周后免疫接种第2次，以后每隔7~12天免疫接种一次。

4.如权利要求1所述抗ZEN卵黄抗体，其特征在于，步骤（3-5）中所述亲和层析柱为HiTrapTM IgY Purification HP；所述滤膜孔径为0.22μm。

5.权利要求1所述抗ZEN卵黄抗体的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

（1）利用Thouvenot法和碳二亚胺法，人工合成ZEN-BSA抗原；

（2）将人工合成ZEN-BSA抗原对蛋鸡免疫接种，免疫3~5次后后收集鸡蛋；具体包括以下步骤：

（2-1）将步骤（1）制备的ZEN-BSA抗原粉末溶于PBS中，然后将溶解有ZEN-BSA的PBS与佐剂乳化制得免疫用ZEN-BSA抗原；

（2-2）将步骤（2-1）制得的免疫用ZEN-BSA抗原免疫接种蛋鸡3~5次；

（2-3）免疫接种蛋鸡完成后2~3周收集鸡蛋，持续收集1~2个月，收集的鸡蛋4℃保存；

（3）从步骤（2）获得鸡蛋中分离纯化ZEN卵黄抗体；具体包括以下步骤：

（3-1）将步骤（2）获得的鸡蛋外壳消毒，打蛋收集蛋黄；

（3-2）将步骤（3-1）收集的蛋黄加入无菌双蒸水稀释，充分混匀，调节pH值，4℃条件下静置12~24小时；

（3-3）将步骤（3-2）的混合液离心，收集得到N升上清液；

（3-4）将步骤（3-3）收集的上清液缓慢加入硫酸铵，混匀溶解；4℃放置 12~24h，离心弃上清，收集沉淀；

（3-5）将步骤（3-4）收集的沉淀用去离子水稀释溶解恢复到N升后，加入硫酸钠，混匀溶解，置室温过夜，离心弃上清，用去离子水溶解沉淀恢复至N升后，亲和层析柱纯化，滤膜除菌，即得无菌抗ZEN卵黄抗体提取液；

（3-6）将步骤（3-5）所得无菌抗ZEN卵黄抗体提取液真空冷冻干燥得抗ZEN卵黄抗体干粉成品。

6.如权利5所述抗ZEN卵黄抗体的制备方法，其特征在于，步骤（3-2）中所述蛋黄与双蒸水的体积比为1︰7~10；所述pH值为5.0~6.0。

7.如权利5所述抗ZEN卵黄抗体的制备方法，其特征在于，步骤（3-4）中硫酸铵按质量分数计，根据所获上清的体积加入硫酸铵时，硫酸铵最终质量分数为50%。