[发明专利]一种以固定化脂肪酶为催化剂的耦联法制备共轭亚油酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种共轭亚油酸的制备方法，尤其涉及一种以固定化脂肪酶为催化剂的耦联法制备共轭亚油酸的方法。

背景技术

共轭亚油酸（Conjugated linoleic acids，简称CLA）是亚油酸（Linoleic acids，简称LA）分子的几种立体和位置异构体的通称，是一系列含有共轭双键的十八碳二烯酸。CLA的双键在碳链上主要有四种位置的排列方式：8，10-、9，11-、10，12-和11，13-，且由于共轭双键两端的碳原子都具有顺式（cis）和反式（trans）两种几何构型，即每种位置异构又具有cis-cis、cis-trans、trans-cis、trans-trans四种几何异构体，所以CLA异构体的种类众多。其中c9，t11-CLA和t10，c12-CLA是含量最多且已经被证实具有生理活性的两种主要异构体。天然的CLA主要存在于瘤胃动物如牛、羊的乳脂及肉制品中，每克乳脂中含量从2-25mg不等，并主要以c9，t11-CLA异构体的形式存在。在天然的植物种子中，并不存在具有生理活性的c9，t11-CLA和t10，c12-CLA这两种异构体。无论是从动物来源还是植物来源中，人们都无法从直接大量获取CLA。

共轭亚油酸（CLA）具有明显的抗癌作用，对胃癌、乳腺癌、肠癌、皮肤癌和前列腺癌有明显的抑制作用。CLA具有抗动脉硬化、降低血脂及调节血压的作用。CLA能有效地发挥“血管清道夫”的作用。可清除血管中的垃圾。有效调节血液粘稠度，达到舒张血管，改善微循环，平稳血压的作用。同时CLA具有抗氧化、抗疲劳作用、免疫调节及减肥增肌等生理活性被越来越多的国内外科研和医疗机构关注。由于CLA无毒，无用量上限，CLA产品的开发将在食品、医药和饲料工业中得到广泛的应用。

商业化的CLA产品混合物含有等量的c9，t11-CLA和t10，c12-CLA，还有微量的t9，t11和t10，t12-CLAs。t9，t11和t10，t12-CLAs具有致癌作用、增加患糖尿病及心脑血管方面疾病的风险，所以控制此异构体的含量是衡量CLA品质的主要指标（An Philippaerts等，2011）。异构体t9，t11和t10，t12-CLAs含量的变化主要与反应温度有关，高温会使得异构体t9，t11和t10，t12-CLAs含量大幅增加（Pierre Juanéda等，2003）。

共轭亚油酸的制备大部分是化学法，其制备过程是通过红花油与甲醇或者乙醇酯交换得到亚油酸甲酯或者乙酯产品（CN200710010361.4），然后通过碱性催化剂催化共轭化后得到甲酯或者乙酯共轭化料，之后进行皂化、酸化、水洗物料得到共轭亚油酸，进一步蒸馏得到最终产品。整个制备工序繁琐，共轭化、酸化、水洗物料时都会引起t9，t11和t10，t12-CLAs的增长，尤其是高温不仅会引起t9，t11和t10，t12-CLAs的增长，还会影响产品的色泽，这些都会直接影响产品品质。

酶催化水解油脂制备自由酸法由于具有反应条件温和，对环境友好等优点，在油脂工业中的应用日益受到人们的青睐。脂肪酶(EC3.1.1.3)是一类特殊的酰基水解酶，多被用来催化一些酯类合成和转化反应。脂肪酶是作为重要的工业酶制剂品种之一，广泛应用于油脂加工、食品、医药、日化等工业，具有其他酶蛋白无法比拟的优点。而在实际应用中游离脂肪酶受环境pH，有机溶剂，高温的影响很容易丧失它的催化活性，而且难以回收再利用，固定化是一种提高酶稳定性的有效方法，同时还有利于酶的循环使用和产物的分离纯化。