[发明专利]痕量RNA实时动态检测方法在审

专利信息
申请号: 201410122611.3 申请日: 2014-03-27
公开(公告)号: CN103882132A 公开(公告)日: 2014-06-25
发明(设计)人: 罗阳;邱晓沛;张洪;蒋天伦 申请(专利权)人: 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院
主分类号: C12Q1/68 分类号: C12Q1/68
代理公司: 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 代理人: 汤东凤
地址: 400038 重*** 国省代码: 重庆;85
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摘要:
搜索关键词: 痕量 rna 实时 动态 检测 方法
【权利要求书】:

1.一种痕量RNA实时检测方法,其特征在于,包括以下步骤:

A1、首先进行DNA探针在芯片上的包被;包括如下方法:石墨烯系统,纯金膜-巯基系统,短链羧化物-氨基系统(如常用的链酶亲和素-生物素);

A2、然后将待检痕量RNA与预先包被的DNA探针杂交,再加入DSN酶以降解杂交双链中的DNA,使RNA游离出来与DNA探针杂交,进而RNA-DNA复合物中的DNA继续被DSN降解,再次使RNA游离出来,重复上述过程,可以使体系中所有RNA-DNA复合物中的DNA均可被DSN酶降解;

A3、由于芯片上包被的DNA探针的量与SPR角度值成正相关,随着芯片上的DNA探针被逐渐酶切,导致其SPR角度值逐渐改变,利用表面等离子体共振(SPR)平台,可观测每个时刻SPR角度值的变化,其反映了检测RNA每个时刻的情况,通过该SPR角度值的变化可对靶分子RNA进行快速定量实时检测;本方法可根据酶切完全时间来定量RNA,或者确定某一时刻根据相应的SPR角度值来定量RNA。

2.根据权利要求1所述的痕量RNA实时检测方法,其特征在于:

A1、为了增大DNA探针在SPR上的监测信号,以纳米金修饰DNA探针;

A2、构建了石墨烯芯片以高效包被DNA探针,确保检测的灵敏度;同时,石墨烯可以将纳米金与芯片上的金膜物理隔离,从而避免SPR信号干扰;

A3、酶切过程中加入的双链特异性核酸酶(DSN)的反应温度可在20℃-50℃,这里首选37℃作为反应最适温度;

A4、为了增强DSN酶在反应过程中的活性,可加入一定浓度SDS,巯基乙醇,或者H2O2水溶液;

A5、本方法利用表面等离子体共振(SPR)平台,可完成检测过程中对RNA水平的实时动态监测。

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