[发明专利]一种适用于培养NK细胞的无血清培养基

说明书

技术领域

本发明涉及一种适用于培养NK细胞的无血清培养基。

背景技术

自然杀伤细胞（NK细胞）是机体天然免疫的主要细胞。无需抗原预先作用就可直接杀伤肿瘤和病毒感染的靶细胞，在机体免疫监视和早期抗感染免疫过程中起重要作用。NK细胞与肿瘤靶细胞密切接触后，可通过释放穿孔素颗粒酶，表达TRAIL、FasL和分泌TNF-α产生细胞杀伤作用。目前，NK细胞已经广泛运用于临床进行肿瘤患者的治疗。

目前临床上获得NK细胞的方法一般从外周血单个核细胞进行扩增，培养过程中一般需要加入动物血清来提高细胞培养的效果，动物血清能够提供细胞生长所需的基本营养物质：氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等，还可以提供激素和各种生长因子：胰岛素、肾上腺皮质激素（氢化可的松、地塞米松）、类固醇激素（雌二醇、睾酮、孕酮）、成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。动物血清中这些物质的存在为临床上获得安全有效的细胞产品提供了坚强的保证。然而，由于动物血清中含有动物成分，若其用于临床细胞治疗体系中，可能会导致一些潜在的风险。主要由于动物血清成分复杂，虽含许多对细胞有利成分，也含有对细胞有害的成分：1）动物血清含一些对细胞产生毒性的物质，如多胺氧化酶，能与来自高度繁殖细胞的多胺反应（如精胺、亚精胺）形成有细胞毒性作用的聚精胺，补体、抗体、细菌毒素等都会影响细胞生长，甚至造成细胞死亡；2）动物个体不同，血清产地、批号不同，每批质量差异甚大，其成分不能保持一致；3）取材中可能带入支原体、病毒，对细胞产生潜在影响，可能导致实验失败或实验结果不可靠性；4）大规模生产中，血清来源越来越困难，价格昂贵，是构成动物细胞培养对生产成本的主要部分之一。

除安全性因素外，NK细胞由于较难在体外大量的增殖，目前在临床上应用的NK细胞培养的方案主要有使用滋养细胞系方法（如使用K562细胞作为滋养细胞系），该方法得到NK细胞纯度较高，但是因为其使用了转基因的方法且K562细胞本身作为一个肿瘤细胞，在临床安全性方面存在质疑。而不使用滋养层细胞其细胞扩增效果及细胞得率均不甚理想，在此背景下，急需一种安全，有效的NK细胞培养的方法来提高临床NK细胞培养的安全性及有效性。发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种适用于培养NK细胞的无血清培养基，所含成分均为化学限定成分，不含任何动物血清成分，从而避免了使用动物血清可能导致的安全性的问题，且成本较低。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种适用于培养NK细胞的无血清培养基，由基础培养基组份I、NK细胞特异性培养组份II以及水组成，其中，所述基础培养基组份I是由以下浓度的组分组成的：

无水氯化钙28～33.82mg/L，i-肌醇13～19mg/L，L-酪氨酸4～5.9mg/L，L-蛋氨酸3～5mg/L，L-缬氨酸6～13.7mg/L，L-苯丙氨酸4～7mg/L，D-葡萄糖1789～1802mg/L，盐酸吡哆醇（维生素B6）0.055～0.066mg/L，次黄嘌呤3～5mg/L，L-丝氨酸7～15mg/L，氯化钠7200～7599mg/L，核黄素0.022～0.048mg/L，亚油酸0.077～0.094mg/L，L-苏氨酸10～13.9mg/L，磷酸氢二钠120～149mg/L，盐酸硫胺0.22～0.34mg/L，硫辛酸0.12～0.29mg/L，L-天门冬酰胺7～18.01mg/L，L-精氨酸盐酸盐198～213mg/L，L-天门冬氨酸6～19.3mg/L，1，4－丁二胺二盐酸盐0.11～0.19mg/L，L-半胱氨酸盐酸盐22～39.12mg/L，L-谷氨酰胺113～149mg/L，L-谷氨酸2～17.7mg/L，丙酮酸钠100～110mg/L，氯化胆碱12～13.99mg/L，甘氨酸6～8mg/L，L-亮氨酸11～13.4mg/L，维生素H0.004～0.008mg/L，L-赖氨酸盐酸盐34～39.5mg/L，L-组氨酸盐酸盐9～25mg/L，L-脯氨酸25～34.5mg/L；如表1所示。

所述NK细胞特异性培养组份II是由以下浓度的组分组成的：