[发明专利]一种适用于培养NK细胞的无血清培养基

权利要求书

1.一种适用于培养NK细胞的无血清培养基，其特征在于：由基础培养基组份I、NK细胞特异性培养组份II以及水组成，其中，所述基础培养基组份I是由以下浓度的组分组成的：

无水氯化钙28～33.82mg/L，i-肌醇13～19mg/L，L-酪氨酸4～5.9mg/L，L-蛋氨酸3～5mg/L，L-缬氨酸6～13.7mg/L，L-苯丙氨酸4～7mg/L，D-葡萄糖1789～1802mg/L，盐酸吡哆醇（维生素B6）0.055～0.066mg/L，次黄嘌呤3～5mg/L，L-丝氨酸7～15mg/L，氯化钠7200～7599mg/L，核黄素0.022～0.048mg/L，亚油酸0.077～0.094mg/L，L-苏氨酸10～13.9mg/L，磷酸氢二钠120～149mg/L，盐酸硫胺0.22～0.34mg/L，硫辛酸0.12～0.29mg/L，L-天门冬酰胺7～18.01mg/L，L-精氨酸盐酸盐198～213mg/L，L-天门冬氨酸6～19.3mg/L，1，4－丁二胺二盐酸盐0.11～0.19mg/L，L-半胱氨酸盐酸盐22～39.12mg/L，L-谷氨酰胺113～149mg/L，L-谷氨酸2～17.7mg/L，丙酮酸钠100～110mg/L，氯化胆碱12～13.99mg/L，甘氨酸6～8mg/L，L-亮氨酸11～13.4mg/L，维生素H0.004～0.008mg/L，L-赖氨酸盐酸盐34～39.5mg/L，L-组氨酸盐酸盐9～25mg/L，L-脯氨酸25～34.5mg/L；

所述NK细胞特异性培养组份II是由以下浓度的组分组成的：

表皮生长因子1～100mg/L，CD16单抗20～100mg/L，神经生长因子1～10mg/L，IL-2120～100mg/L，成纤维素细胞生长因子1～100mg/L，IL-1850～150mg/L，卵泡刺激因子50～500mg/L，IL-1250～500mg/L，CD3单抗50～500mg/L，CD125单抗50～500mg/L。

2.根据权利要求1所述的适用于培养NK细胞的无血清培养基，其特征在于：所述基础培养基组份I是由以下浓度的组分组成的：无水氯化钙29mg/L，i-肌醇15mg/L，L-酪氨酸4.5mg/L，L-蛋氨酸4mg/L，L-缬氨酸13.5mg/L，L-苯丙氨酸6mg/L，D-葡萄糖1800mg/L，盐酸吡哆醇0.055mg/L，次黄嘌呤5mg/L，L-丝氨酸8mg/L，氯化钠7500mg/L，核黄素0.028mg/L，亚油酸0.079mg/L，L-苏氨酸13mg/L，磷酸氢二钠135mg/L，盐酸硫胺0.25mg/L，硫辛酸0.19mg/L，L-天门冬酰胺14.4mg/L，L-精氨酸盐酸盐200mg/L，L-天门冬氨酸13.5mg/L，1，4－丁二胺二盐酸盐0.18mg/L，L-半胱氨酸盐酸盐29mg/L，L-谷氨酰胺124mg/L，L-谷氨酸13.9mg/L，丙酮酸钠105mg/L，氯化胆碱12.9mg/L，甘氨酸7mg/L，L-亮氨酸13.4mg/L，维生素H0.005mg/L，L-赖氨酸盐酸盐37.5mg/L，L-组氨酸盐酸盐14mg/L，L-脯氨酸25.6mg/L；

所述NK细胞特异性培养组份II是由以下浓度的组分组成的：

表皮生长因子50mg/L，CD16单抗70mg/L，神经生长因子10mg/L，IL-2160mg/L，成纤维素细胞生长因子50mg/L，IL-1850mg/L，卵泡刺激因子150mg/L，IL-12100mg/L，CD3单抗100mg/L，CD125单抗100mg/L。

3.权利要求1或2所述的适用于培养NK细胞的无血清培养基的制备方法，其特征在于：步骤如下：

（1）取组份I的各原料，混合混匀，在60℃真空下干燥15小时，备用；取组份II的各原料，在30℃真空下干燥18小时，混合混匀，备用；

（2）将上述干燥后的组份I和组份II混合，针磨3个小时，过30目筛，得固态粉末，加水，混匀，0.2μm滤膜过滤，即得适用于培养γδT细胞的无血清培养基。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中，针磨生产过程中，温度控制在20～25℃，湿度控制在15～20%，氮气压力控制在150～300psi。