[发明专利]一种氧化损伤体外检测方法及检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于医学检测领域，更具体地，涉及一种氧化损伤体外检测方法及检测试剂盒。

背景技术

随着社会步伐的加快，人们的生活节奏的加快、工作压力和竞争压力的增大，导致大部分人群处于亚健康状态。现在出现的许多慢性疾病和发病率逐年上升的疾病如心血管疾病、心脏病和糖尿病等都跟人体产生自由基水平的多少密切相关，而自由基会通过对人体的氧化还原反应导致人体的氧化损伤。现代社会生活中人们健康意识的逐渐增强和科技日新月异，在家庭中可以广泛使用的快速诊断技术方兴未艾，所以及时检测和了解人体氧化损伤程度，并指导人们及时诊治或通过改变不良的生活习惯和调节不好的饮食习惯，从而时刻处于健康状态。基于以上原因，亟需一种氧化损伤体外快速检测方法和产品。

现本领域内的主要专利有美国专利NO.6165797、有罗伯特·D·埃布尔斯发明及梅迪-泰克控股公司申请的“用于检测丙二醛的试剂、制备该试剂的方法以及使用该试剂的试剂盒”的公开番号为WO2004/01191国际专利和日本申请的公开番号为WO2004/11635A1的国际专利，申请号为03818036.7的中国专利。因美国专利NO.6165797为单组分，未能控制好pH值的影响而易出现假阳性，美国和日本申请的两项国际专利大同小异，其用0.9～1.1mL的实验样品比约0.1～0.2mL的检测试剂混合，实验样品为晨尿中段尿，检测试剂是由10g焦亚硫酸钠、10mL浓缩的磷酸、5g碱性品红、约1000mL水组成的pH=1.88的溶液，约2～5分钟后观察颜色生成。

现有技术有两方面问题：其主要存在有以下两种问题：1.尿液的pH变化范围较大，而检测试剂缓冲能力不够，导致反应pH值有较大的变化，结果易受pH值的影响从而出现较大偏差。2.选择反应的pH值较高，在此pH值下显色剂自身显色且底色较深，会掩盖尿液中醛类与检测试剂产生的颜色反应，影响结果的准确性，甚至出现假阳性。

发明内容

针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本发明提供了一种氧化损伤体外检测方法及检测试剂盒，其目的在于采用缓冲液和显色剂双组份试剂，两个步骤的测试方法，由此解决检测试剂缓冲能力不够、反应pH值较高导致结果准确性低的技术问题。

为实现上述目的，按照本发明的一个方面，提供了一种氧化损伤检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）采集尿样作为检验样品；

（2）向检验样品中加入pH值在3至5之间的磷酸盐缓冲溶液，混合均匀，使得溶液pH值在3.7至3.9之间或4.5至5之间；

（3）向步骤（2）中的混合液，加入品红显色剂，混合均匀后使得品红在最终混合液中浓度在0.04g/L至1.4g/L之间，静置3～5min，根据溶液颜色深浅或348nm吸光值，按照溶液颜色越深或吸光值越大氧化损伤程度越高的原则，确定其氧化损伤程度。

优选地，所述的检测方法，其所述步骤（1）中采集的尿样为早晨中段尿样。

优选地，所述的检测方法，其所述步骤（2）中磷酸盐缓冲溶液的浓度为4mol/L至6mol/L。

优选地，所述的检测方法，其所述步骤（3）品红显色剂，pH值在1.0至4.0之间，每升包括碱性品红0.5g至15g和亚硫酸盐0.03mol至0.35mol。

优选地，所述的检测方法，其所述步骤（3）显色剂，其制备步骤包括：

（a）每称取0.1g-3g碱性品红试剂溶于200ml水，形成碱性品红溶液；

（b）向碱性品红溶液中加入亚硫酸盐0.006mol至0.07mol，溶解后用强酸调节pH值在1.0至4.0。

（c）向步骤（b）得到的溶液中，按照质量比例0.5%至30%逐渐加纯净活化的活性炭，同时间断震荡至溶液无色，过滤。

优选地，所述的检测方法，其所述步骤（3）显色剂的制备方法步骤（b）中的强酸为浓硫酸、浓硝酸和/或浓盐酸。

优选地，所述的检测方法，其所述步骤（3）当溶液颜色在无色至微黄之间时，确定氧化损伤程度为无损伤，溶液颜色在微黄至浅红之间时，确定氧化损伤程度为轻度损伤，溶液颜色在浅红至红色之间时，确定氧化损伤程度为中度损伤，溶液颜色在红色至深红之间时，确定氧化损伤程度为重度损伤，溶液颜色在深红至紫色之间时，确定氧化损伤程度为极重损伤。